[发明专利]以HBeAg蛋白和/或HBeAg抗原表位多肽作为免疫原的疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及乙肝治疗性疫苗，特别涉及以HBeAg蛋白和/或HBeAg抗原表位多肽作为免疫原的疫苗。 

背景技术

慢性乙肝是危害人类健康的全球性问题，对人类健康和世界经济造成极大影响。乙肝治疗性疫苗已成为本世纪慢性乙肝治疗研究的热点，未来治疗性乙肝疫苗的国内市场有望达到30亿人民币，且以年15％的速度持续增长。因此，发展乙肝治疗性疫苗的基础和应用研究具有重大的科学意义和巨大的社会及经济效益。 

目前，国际上，正在研制的乙肝治疗性疫苗主要有大剂量基因工程乙肝疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、免疫复合物疫苗、抗体化抗原疫苗等。在国内，熊思东、吴玉章研究小组分别研制的乙肝治疗性疫苗均已完成或正在进行临床试验，并显现出显著治疗效果，但是，现有乙肝治疗性疫苗大多仍处于研究阶段，仍然面临许多问题： 

(1)现有的治疗性疫苗临床研究多集中于利用前S抗原和S抗原，并通过以免疫原性极强的HBcAg为载体来激活T、B细胞应答，存在一定的局限性，对部分患者的治疗效果并不满意； 

(2)乙肝患者宿主机体免疫耐受状态使得疫苗设计难度显著增加，现有治疗性疫苗并不能直接实现HBeAg血清转换，取得满意治疗效果； 

(3)治疗性疫苗的安全性和标准化问题尚待深入研究。 

因此，未来乙肝治疗性疫苗的研究应综合分析慢性乙肝患者疾病转归规律和免疫耐受机制、筛选新的免疫原提高乙肝治疗性疫苗的免疫原性，优化乙肝治疗性疫苗设计策略及免疫程序、选择适当的佐剂，合理辅助使用细胞因子或抗病毒药，以利于恢复慢性HBV感染者的免疫系统的反应性、打破 机体的免疫耐受状态、实现HBsAg血清转换、获得保护性抗-HBs抗体，成为当前乙肝治疗性疫苗研究的首要问题。 

完整乙型肝炎病毒即Dane颗粒，由外膜、核衣壳组成。核衣壳内含有一个环状的DNA分子、DNA多聚酶、具有蛋白激酶活性的DNA结合蛋白。外膜携带乙肝表面抗原(HBsAg)，核壳携带乙肝核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)。HBV基因组有S、C、X、P、前-前-S和前-X 6个基因。 

HBeAg和HBcAg均由HBV的ORF-C编码。HBcAg具有极强免疫原性和抗原性(既是B细胞依赖抗原，也是T细胞非依赖抗原)，其抗原性较HBeAg强100倍，是唯一能引发显著免疫反应的HBV抗原，能诱导产生CTL，并辅助保护性抗原(如S、M、L抗原)产生体液免疫和增强细胞免疫应答。因此，几乎所有HBV感染者均会出现抗-HBc抗体。 

血清HBeAg是分泌性非颗粒状病毒衣壳蛋白，与HBcAg约75％氨基酸序列相同，较HBcAg在羧基端少了34个氨基酸，以Va1～149为羧基末端，位于前C区-7位的半胱氨酸与C区中61位的半胱氨酸形成的二硫键是HBeAg区别于HBcAg的独特的二级结构，也是使HBeAg具有与HBcAg完全不同的抗原表位和免疫反应性的原因。 

HBeAg是乙肝病毒特有的免疫耐受因子，通过下调TLR2表达引起宿主免疫耐受(Stephen Locarnini)。此外，HBeAg还能能阻断CTL，抑制宿主T细胞的细胞毒活性，将免疫攻击从感染的肝细胞移开，从而形成对HBV感染的免疫耐受。而乙肝患者的免疫耐受被认为是慢性乙肝迁延不愈、并出现不良结局的重要原因之一，也是治疗上最难解决的问题。以HBeAg阳性、HBVDNA滴度高为特征的围产期野生型C基因型HBV感染患者仍是我国慢性乙肝的主要患者群体。 

HBV感染后的自然病程和治疗过程中，其病程可分为潜伏期、症状期、清除期、免疫期四个阶段，其转归与病毒的基因型、易突变性、是否整合， 宿主性别、营养、免疫力、感染年龄、是否合并其他嗜肝病毒感染或酗酒，是否接受抗病毒治疗、免疫调节治疗等多种因素有关。一旦出现HBeAg血清转换，机体产生抗-HBe抗体，就意味着宿主免疫反应增强，病程进入清除期，病毒复制停止。在此基础上，如果出现HBsAg血清转换(血清HBsAg转阴)，则说明病程进入免疫期，产生保护性抗-HBs抗体，体内病毒被彻底清除。