[发明专利]一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及环境污染技术，具体的说是一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法。

背景技术

抗生素因具有促进生长和防止动物疾病的双重功效而被广泛应用于农牧业生产。但是，由于对经济利益的过分追求和对抗生素的盲目依赖，近年来抗生素的使用量不断提高甚至以不合理的高剂量和高频率使用。据统计，美国年消耗农用抗生素24.6×10⁷t；中国是世界抗生素生产第一大国，仅2003年就生产青霉素2.8×10⁴t，土霉素1.0×10⁴t，分别占当年世界总产量的60％和65％。在众多抗生素中，磺胺类和四环素类抗生素是国内外畜禽养殖场使用最为广泛的两类抗生素。大量的生产和使用导致抗生素通过多种途径进入各种环境基质从而引发污染事故。

磺胺类和四环素类抗生素长期以来被用于动物疾病的治疗和预防，通常是作为动物饲料添加剂以亚治疗剂量添加到动物饲料中。这些作为饲料添加剂的抗生素被动物食用后，并不能被动物完全吸收利用，其中70％以上的药物会以母体形式通过粪便排出进入生态环境中，当这些含有抗生素的畜禽粪便作为有机肥料施入农田后，造成抗生素在土壤中残留。此外，由于缺乏针对性的处理工艺，污水处理厂并不能将抗生素有效地去除，很多抗生素残留在污泥中，这些含有抗生素的污泥回用农田时，也会将抗生素带入土壤环境，从而造成土壤环境污染。

近年来，抗生素的环境污染问题及其生态危害已经成为国际环境领域普遍关注的热点问题。抗生素残留检测方法的建立对于实现抗生素在环境基质中的迁移转化、生物有效性、生态毒理效应以及生态风险评估等方面的研究具有重要的现实意义。由于抗生素种类繁多，抗生素残留检测的方法也不尽相同。目前已有报道的关于磺胺类和四环素类抗生素的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液相-质谱联用技术等，不同的检测方法有其不同的适用领域和优缺点。例如，微生物法操作简单，但测定时间长、灵敏度低、特异性差；薄层色谱法具有简单、快速、不需复杂仪器等优点，但该法分辨率和灵敏度较低；液相-质谱联用法提供的信息量最多，既可以进行准确定量又可以进行准确的定性分析，灵敏度高，但该法通常情况下样品前处理比较复杂，仪器昂贵不易推广应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种测定土壤、污泥及动物粪便中磺胺类及四环素类抗生素的方法，其特征在于：

1)将预处理后的样品加入到含有CaCl₂的提取剂中溶解，溶解后依次经超声提取、震荡提取，而后离心收集上清液，待用；

2)将上述收集的上清液通过HLB固相萃取柱分离，萃取富集收集洗脱液，过滤后待用；

3)利用高效液相色谱测定上述收集的滤液中磺胺类及四环素类抗生素的量；

其中，提取剂为按体积比1∶1组成的甲醇和EDTA-Mcllvaine缓冲液，CaCl₂与提取剂的质量比为1∶9；固相萃取洗脱液为甲醇。

所述高效液相色谱条件为：流动相由乙腈(A)和0.01mol/L草酸溶液(B)组成，柱温为30℃，流速为1.0ml/min；进样量为20μl。所述检测器波长范围设定为270nm-370nm；高效液相色谱仪采用Waters2695-2696，液相色谱柱选用Waters X TerraRP-18(250×4.6mm，5μm)。所述流动相为经过0.45μm有机膜超声震荡10min后的乙腈(A)，经0.45μm水膜超声震荡10min后的浓度为0.01mol/L的草酸溶液(B)。

所述样品预处理为将污水处理厂采集的脱水污泥、畜禽养殖场采集的畜禽粪或土壤样品用锡箔纸包裹，冷冻干燥后于-20℃中保存，备用。

所述步骤1)将2g预处理后的样品加入到10ml含有CaCl₂的提取剂中溶解，溶解后依次经超声提取、震荡提取，各15min，而后以4000r/min离心10min收集上清液，沉淀再次溶解在含有CaCl₂的提取剂中提取2-3次，收集上清液，合并上述上清液待用。