[发明专利]一种检测植物根际微生物的荧光原位杂交方法有效
| 申请号： | 201110266857.4 | 申请日： | 2011-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN102994614A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 祝贵兵;王雨;尹澄清 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生态环境研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100085 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 植物 微生物 荧光 原位杂交 方法 | ||
1.一种用于检测植物根际微生物的荧光原位杂交方法，包括如下步骤：
(1)植物根系片段的固定；
(2)荧光原位杂交；
其特征在于：所述步骤(1)和所述步骤(2)之间还包括如下步骤甲：将完成步骤(1)的植物根系片段用0.0001至0.1mol/L焦磷酸四钠水溶液进行处理，然后弃去所述植物根系片段。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤甲中的处理条件为：20-30℃、15-60分钟。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤甲中的处理条件为22℃、20分钟；所述焦磷酸四钠水溶液的浓度为0.001mol/L。
4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤乙：将完成所述步骤甲的溶液体系离心收集沉淀，用PBS缓冲液冲洗并悬浮。
5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)为：将所述植物根系片段浸泡于溶液甲中12小时；所述溶液甲是将3体积份固定液和1体积份3×PBS缓冲液混合得到的；所述固定液的pH为7.0-7.4，含有4g/100ml多聚甲醛。
6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述荧光原位杂交的条件为：46℃杂交1.5小时。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述荧光原位杂交所用的探针上具有荧光素标记；所述荧光素优选为FLUOS荧光素。
8.如权利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述荧光原位杂交所用的探针的核苷酸序列如序列表的序列1所示。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述荧光原位杂交所用的探针的浓度为8.3pmol/μl。
10.如权利要求1至9中任一所述的方法，其特征在于：所述植物为灯芯草。
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