[发明专利]一种促肝细胞生长素，其制剂和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种促肝细胞生长素，具体讲，涉及一种新的促肝细胞生长素，及其制剂和用途。

背景技术

促肝细胞生长素是从新鲜乳猪肝脏中提取的小分子量多肽类混合物，分子量在10，000以下。其药理作用主要为可刺激正常肝细胞DNA的合成，促进肝细胞再生，对损伤的肝细胞有保护作用，促进肝功能的恢复，还有调节机体的免疫功能和抗肝纤维化作用。临床上用于治疗重型肝炎、慢性活动性肝炎和肝硬化等。

目前，针对促肝细胞生长素这一生物制剂类药物，已经有很多专利和文献报道。

在专利ZL03116052.2中，公开了一种促肝细胞生长素注射液及制备方法，其中的肝细胞生长素为从乳猪中提取分离获得的一种活性蛋白质，占总蛋白含量的60％以上，该促肝细胞生长素是通过以下方法制备：1)匀浆；2)搅拌：加提取液，室温下低速60转/min搅拌一个小时；3)加热，水浴加热提取罐，液体温度达到95℃时停止加热，保持15～20分钟；4)过滤；5)提纯：将过滤液上样至DEAE Sepharose FF柱中，采用含有氯化钠的PBS溶液进行洗脱，再用超滤膜除盐。该制备方法的缺点有：搅拌时间过长、在高温条件95℃下加热时间过长，很容易造成促肝细胞生长素中活性多肽的分解和失活；另外，其提取工艺繁琐，还需要加盐的洗脱液洗脱后再脱盐，这些操作步骤都会损失活性物质的含量，造成提取物活性低，提取率低。

专利ZL200610047371.0公开了一种促肝细胞生长素水针剂制剂的制备方法，其中公开了一种促肝细胞生长素溶液的制备方法，包括以下步骤：1)选材；2)组织处理；3)匀浆：低温匀浆2分钟；4)冻融：反复冻融3次；5)热变性去除大分子蛋白：升温至85℃，恒温5分钟；6)离心；7)分级超滤及病毒灭活：一级超滤收集分子量30,000Da以下的组分；二级超滤收集分子量为10,000Da以下的多肽组分，60℃保温10小时，灭活病毒。该提取方法中采用了反复冻融的工艺，反复冻融这一工艺方法极易产生降压物质，并且该工艺方法中热变性的温度过高，同样会造成多肽类物质的失活。

为此，发明人提出了一种生物活性大幅度提高的促肝细胞生长素及其制剂。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供一种促肝细胞生长素；

本发明的第二发明目的在于提供这一促肝细胞生长素的制剂；

本发明的第三发明目的在于提供这一促肝细胞生长素的用途。

为了完成本发明的第一发明目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种促肝细胞生长素，制备方法包括以下步骤：

(1)选材：原材料选用当天宰杀的新鲜乳猪肝；

(2)组织处理：乳猪肝除去筋膜、结蒂等组织后，用纯水洗净；

(3)室温下与注射用水混合，匀浆的速度为800～1000转/分，匀浆液冷冻至-20～-35℃；

(4)将-20～-35℃冻存至少7天的匀浆液解冻后，加热至83℃～85℃后立刻撤掉加热源，放入滤布或滤网自然过滤，滤液用NaOH溶液调节PH值至6.5；

(5)将调节至PH为6.5的溶液用截留分子量20000的中空纤维柱过滤，然后经截留分子量10000的超滤膜过滤，超滤液冷冻至-20℃～-30℃密封保存；

(6)将冻存至少7天的超滤液解冻，过滤，上清液用反渗透膜浓缩至原体积的1/3～1/2，浓缩液经截留分子量10000的中空纤维柱过滤，再经0.22um的滤膜除菌后分装，-18℃以下保存。

本发明的第一优选技术方案为：所述的肝细胞生长素制备方法中的步骤(3)中，匀浆液以10～18℃/min的速度从室温冷冻至0～-5℃，再以4～8℃/min的速度冷冻至-20～-35℃，优选匀浆液以12～15℃/min的速度从室温冷冻至0～-5℃，再以3～6℃/min的速度冷冻至-20～-35℃/min。

在步骤(5)中，超滤液以10～15℃/min的速度从室温冷冻至0～-5℃，再以2～6℃/min的速度冷冻至-20～-30℃，优选超滤液以12～15℃的速度从室温冷冻至0～-5℃，再以3～5℃/min的速度冷冻至-20～-30℃/min；

本发明的第二优选技术方案为：在步骤(3)中，质量比为水∶猪肝1.1～1.3∶1，优选为质量比为水∶猪肝1.1∶1。

本发明的第三优选技术方案为：在步骤(3)中，匀浆的时间为3～10分钟，优选为5分钟。