[发明专利]阳离子脂质体及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及免疫治疗领域，尤其涉及一种阳离子脂质体及其制备方法。

【背景技术】

疫苗是预防和控制传染性疾病发生发展的重要手段。免疫佐剂(又称非特异性免疫增生剂)则是疫苗中不可或缺的组成成分，能够有效地促进疫苗诱导的特异性免疫反应。随着疫苗研究的飞速发展，新型的基因工程疫苗正逐步取代传统的减毒活疫苗和灭活疫苗。与传统的疫苗相比，基因工程疫苗具有纯度高、特异性强、安全性好等优点，然而由于其免疫原性普遍较差，迫切需要结合有效的免疫佐剂，从而提高疫苗的免疫效力。

脂质体纳米颗粒是由磷脂双层壳包裹水相核心形成的球形的实体，其结构类似生物膜，是一种生物相容性好且无毒的纳米材料。它可包封水溶性和脂溶性药物，具有减少药物剂量、缓释、及靶向性释放药物等优点，因而被广泛用于纳米抗肿瘤药物的开发。此外，纳米脂质体也是一种优良的抗原载体，不仅能够包裹一系列理化性质不同的抗原及免疫佐剂，保护蛋白多肽抗原不被降解，还可以促进抗原呈递细胞对抗原的吞噬及呈递，提高机体的特异性免疫反应。基于以上这些优点，脂质体纳米颗粒作为一种新型的疫苗载体，正逐渐用于细菌疫苗、病毒疫苗、抗寄生虫疫苗以及抗肿瘤疫苗等研制开发。中性脂质体和表面携带正电荷的阳离子脂质体是最常用的纳米疫苗载体。其中特别值得关注的是阳离子脂质体，它不但是优良的蛋白/多肽抗原载体，还是一种新型的免疫佐剂，可直接活化抗原呈递细胞，增强疫苗诱导的免疫反应。目前，阳离子脂质体已被GSK公司用于新一代流感疫苗。

以树突状细胞(dendritic cell，DC)为代表的抗原呈递细胞(antigen-presenting cells，APCs)在免疫反应中占据核心地位。其主要作用是识别、摄取和呈递抗原，继而引发淋巴细胞活化和特异性体液及细胞免疫应答。APCs表面广泛表达C型凝集素类受体，如甘露糖受体(mannose receptor，MR)、DEC205/gp200-MR6等。这些受体直接参与了抗原呈递细胞对抗原的识别、摄取和呈递过程。在抗原和疫苗表面修饰C型凝集素类受体的特异性配体，如甘露糖和甘露聚糖，可促进抗原呈递细胞对抗原的摄取，增强疫苗的免疫效力。Copland(Copland.M.J.，Baird，M.A.，Rades，T.，McKenzie，J.L.，Becker，B.，Reck，F.，Tyler，P.C.and Davies，N.M.(2003)Liposomal delivery of antigen to human dendritic cells.Vaccine 21，883-90.)等在中性脂质体中掺入末端修饰有甘露三糖的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(trimannose-dipalmitoyl phosphatidylethanolamine，man3-DPPE)，从而使脂质体表面携带甘露糖残基。结果表明man3-DPPE修饰的脂质体不但提高DC对抗原的摄取，而且显著增强DC诱导的T淋巴细胞增殖。Kojima等(Kojima，N.，Biao，L.，Nakayama，T.，Ishii，M，Ikehara，Y.and Tsujimura，K.(2008)Oligomannose-coated liposomes as a therapeutic antigen-delivery and an adjuvant vehicle for induction of in vivo tumor immunity.J Control Release 129，26-32.)则发现，man3-DPPE修饰可促进脂质体肿瘤疫苗在外周淋巴结内的集聚，并显著增强疫苗诱导的抗肿瘤免疫。

目前的研究主要通过化学键合的方法将甘露糖或寡甘露糖直接修饰到脂质体的磷脂分子上，使得脂质体表面携带甘露糖分子，从而提高其抗原呈递细胞靶向性。然而，事实上由于颗粒大小、电荷、及表面性质等理化因素的影响，脂质体疫苗在注射入体内后绝大部分滞留于注射位点，不能有效地进入淋巴器官，降低了脂质体疫苗的免疫效力。

【发明内容】

基于此，有必要提供一种能够提高脂质体疫苗免疫效力的阳离子脂质体及其制备方法。

一种阳离子脂质体，包括阳离子脂、中性磷脂、聚乙二醇衍生化磷脂以及甘露糖或甘露寡糖；所述阳离子脂、所述中性磷脂以及所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂分子组成球壳状的磷脂双分子层；所述甘露糖或甘露寡糖连接在所述聚乙二醇衍生化磷脂的一端形成甘露糖或甘露寡糖修饰的聚乙二醇衍生化磷脂。

优选的，所述阳离子脂与所述中性磷脂的摩尔比为1∶19～99∶1。