[发明专利]直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法

权利要求书

1.一种直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

 1．1菌种：采用醋酸杆菌 ，在种子培养基中添加果汁，连续驯化培养、分离纯化，获得醋酸菌试管斜面菌种，菌种形态正常，活力强，无杂菌；

1．2菌种培养： 

a、种子培养：

     一级种子培养基：按重量百分比葡萄糖 1.0 % ～ 3.0 %、酵母膏 0.5 % ～ 1.5 %、碳酸钙 0.5 % ～ 2.0 %、酒精1.0 % ～ 4.0 %取料，先将葡萄糖、酵母膏、碳酸钙溶于水中，水定容至 1000 mL，pH 值自然：pH4.5 ～ 6.5；然后分装于 1000 mL 三角瓶中，每瓶装量为 200 mL；培养条件：培养基于110～125 ℃下灭菌 15 ～30 分钟，冷却至 30 ～ 34 ℃，接入醋酸菌试管斜面菌种，在32 ～ 34 ℃下振荡培养16 ～ 24 小时，得到一级液体醋酸菌种，菌种镜检菌体生长正常，无杂菌；

b、发酵培养：

发酵培养基：按重量百分比葡萄糖1.0 %～3.0 %、柑橘汁20 %～50 %、黄豆芽汁2.0 %～8.0 %、食用酒精2.0 %～6.0 %， pH4.5 ～ 6.5；

培养条件：培养基于100 ～110℃ 下灭菌 5～ 15 分钟，冷却至30 ～ 34 ℃ ,接入经种子培养制得的液体醋酸菌种 5～ 10 %，在32 ～ 34 ℃ 下通气培养，每分钟通气量为发酵液体积的20 % ～ 30 %，培养时间为12 ～ 20 小时；

    1．3：菌体收集：将上述醋酸菌发酵液采用冷冻高速离心机离心15 ～ 30 分钟收集菌体，用 2 ～ 5 倍的生理盐水稀释菌体，制备醋酸菌菌悬液，0 ～ 4 ℃下保存备用；

    1．4干燥：在 -20～-35 ℃ 冷柜中预冻 12 ～ 24 小时，然后真空冷冻干燥机中干燥 16 ～ 24 小时，即得。

2.根据权利要求1所述的直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法，其特征在于：种子培养过程中增加二级种子扩培步骤：采用一级种子培养基，配好装入种子培养罐中，110 ～ 125 ℃下灭菌 15 ～30 分钟，冷却后在无菌条件下，按重量百分比添加3.0 %食用酒精，冷却至 30 ～ 34 ℃；按重量百分比接入5 ～ 10 %一级液体醋酸菌种，在 32 ～ 34 ℃ 下通气培养培养 12 ～ 16 小时，每分钟通气量为发酵液体积的20 %～30 %，得到二级液体醋酸菌种，菌种镜检菌体生长正常，无杂菌。

3.根据权利要求1或2所述的直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法，其特征在于：醋酸杆菌 AS1.41 或沪酿 1.01 经醋酸菌种子培养基按重量百分比添加10 % ～ 30 %果汁，连续驯化培养、分离纯化获得。

4.根据权利要求1或2所述的直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法，其特征在于：冷冻干燥之前，在所述醋酸菌悬液按重量百分比添加脱脂奶粉 5 % ～ 20 %或麦芽糊精 2 %～10 %或β-环状糊精 2 % ～10%或海藻糖 1 % ～ 8 %或蔗糖 1 % ～ 8 %之一种以上。

5.根据权利要求1或2所述的直投式高活性浓缩固态果蔬醋酸发酵剂的制备方法，其特征在于：果汁为柑橘汁或苹果汁。