[发明专利]一种文心兰组培育苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种文心兰组培育苗的方法。

背景技术

文心兰（Oncidium）又名舞女兰、金蝶兰，系兰科文心兰属植物，属热带复茎性陆生兰，全世界原生种多达750种以上，原产南美洲热带地区，种类分布最多的有巴西、美国及秘鲁等,是世界五大切花品种之一。文心兰一年仅繁殖2-3个芽，繁殖系数低，速度慢，难以满足市场的需求,组培育苗是文心兰主要扩繁增殖手段。

文心兰组培育苗一般以花梗、茎尖等为外植体先诱导再生芽，再生芽通过丛生芽和原球茎两种途径进行增殖；丛生芽途径具有变异率低，有利于保持母本性状的优点，但繁殖系数低；原球茎途径具有繁殖系数高，有利于工厂化大规模生产的优点，但种苗变异率高；现有大部分的文心兰组培的各阶段的培养基交较复杂，差异性较大，不利于工厂化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的文心兰组培技术的不足，提供一条繁殖系数高和变异率低的文心兰的组培岳庙方法。

本发明的一种文心兰的组培育苗方法，包括外植物体消毒、初诱导培养、继代培养和生根培养，具体步骤如下：

（1）外植物体消毒，选用花梗腋芽，用质量分数为0.1%多菌灵溶液浸泡，冲洗干净，然后用抗褐化剂浸泡，再用质量分数为0.1%升汞常规消毒；

（2）初诱导培养，培养基为：1/2MS+10g/L琼脂+25g/L蔗糖+1g/L活性炭 + 2.5-3.0mg/L TDZ+ 0.2-0.4 mg/L NAA，pH值5.8，光照时间为14 hr/d，光照强度1500～2000 Lux，温度为25±2℃；

（3）将丛生芽分化继代培养，培养基为：1/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+1g/L 活性炭+1g亚硫酸钠+2.8 mg/L TDZ+0.32mg/L NAA，pH值5.8，光照时间为14 hr/d，光照强度1500～2000 Lux，温度为25±2℃； 

（4）生根培养，培养基为：1/2MS+0.2~0.4mg/L 6-BA+0.8~1.6mg/L NAA+1g/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 g/L琼脂，pH值5.8，光照时间为14 hr/d，光照强度1500～2000 Lux，温度为25±2℃。

本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，抗褐化剂为质量分数为0.2%的维生素C蒸馏水溶液。

本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，丛生芽分化继代增殖培养可采用固体培养方式进行培养。

本发明所述的一种文心兰的组培育苗方法，生根培养基中6-BA浓度为 0.3mg/L ，NAA浓度为 1.2mg/L。

本发明达到的有益效果：

（1）外植物体用2%维生素C水溶液浸泡30分钟后再用0.1%升汞常规消毒，可使外植体产生褐化时间从30分钟延缓到180分钟；

（2）初诱导培养中添加抗褐化物质活性炭或亚硫酸钠后，能显著降低外植体褐化率，从而显著提高外植体接种成活率和分化率；

（3）1/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖（PH值5.8）为基本培养基，同时添加1g/L活性炭和亚硫酸钠后，采用固体培养方式进行丛生芽增殖效果较好，丛生芽诱导分化率高，为90.0%，增殖系数可达6.0-7.4，经5-6代继代增殖培养后，丛生芽变异率仅为0.1%，；

（4）梗初诱导、丛生芽继代增殖配方均相同的1/2MS培养基进行无根丛生芽的生根诱导研究取得较好的效果，单独使用生长素NAA进行生根诱导，芽苗粗壮、矮小，平均每株发根1-2条，根系粗壮，但是培养40天左右黄化严重。使用细胞分裂素6-BA与生长素NAA进行组合后，文心兰丛生芽生根率随生长素浓度增加而逐渐提高，高浓度的细胞分裂素抑制芽苗的生长而促进侧芽及类原球茎的萌蘖，影响芽苗的质量。通过多次重复试验，在1/2MS培养基中添加0.3mg/L 6-BA和1.2mg/L NAA为文心兰丛生芽生根诱导培养基的效果好，接种60天后生根率可达100.0%，芽苗生长整齐，平均高度在3.0左右，每株长根3-4条，根长1.5-3.5cm，根粗0.5mm，60%产生假鳞茎；

（4）初代培养、继代培养和生根培养各个阶段的培养基配方差异较小，初代培养和继代培养的激素组合相同，仅是浓度有细微差异，有利于工厂化组培育苗。

具体实施方式：

取文心兰品种‘南茜’9-10月初带腋芽花梗茎段为外植体。修剪掉较老的组织，在自来水下冲洗干净，用0.1%多菌灵+0.2%洗洁净水溶液浸泡30分钟，冲洗干净；然后用抗褐化剂2%维生素C蒸馏水溶液浸泡30分钟，用0.1%升汞常规消毒10分钟，最后在超净工作台上剪切外植体。以处理好的带腋芽花梗茎段为外植体，初诱导培养基配方为1/2MS+10g/L琼脂+25g/L蔗糖+1g/L活性炭+3.0mg/L TDZ+0.4 mg/L NAA，PH值为5.8，光照时间14 hr/d，光照强度2000lux，培养温度为25±2℃，成活率为86.3%，分化率可达到53.5%； 将再生芽在超净工作台上用手术刀切割成带1叶芽段，长1cm，在1/2MS+10g/L琼脂+30g/L蔗糖+1g/L 活性炭+1g亚硫酸钠+2.8 mg/L TDZ+0.32mg/L NAA培养基中培养，培养条件为：PH值为5.8，光照时间14hr/d，光照强度2000lux，培养温度为25±2℃，丛生芽诱导分化率，为90.0%，增殖系数为6.0-7.4，经5-6代继代增殖培养后，丛生芽变异率仅为0.1%；生根诱导培养基为：1/2MS+0.3mg/L 6-BA+1.2mg/LNAA+1g/L活性炭+20 g/L蔗糖+8 g/L琼脂，PH值为5.8，光照时间14hr/d，光照强度2000lux，培养温度为25±2℃，丛生芽接种60天后生根率达100.0%，芽苗生长整齐，平均高度在3.0左右，每株长根3-4条，根长1.5-3.5cm，根粗0.5mm, 60%产生假鳞茎。