[发明专利]胆固醇酯酶及其核苷酸序列、重组载体、重组宿主细胞及制法和试剂盒

权利要求书

1.一种胆固醇酯酶，其特征在于，所述胆固醇酯酶的氨基酸序列为

(1)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或者

(2)对(1)所述的氨基酸序列进行一个或几个氨基酸的缺失、添加和/或取代，但其胆固醇酯酶的功能不变的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的胆固醇酯酶，其中，所述胆固醇酯酶的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

3.一种编码胆固醇酯酶的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列为编码权利要求1或2所述的胆固醇酯酶的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列为

(1)SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；或者

(2)对SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列进行一个或几个核苷酸取代、缺失或增加而得到的核苷酸序列，该核苷酸序列编码的胆固醇酯酶功能不变。

5.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列为SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列。

6.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体由空载体和插入该空载体的目的基因组成，所述目的基因为权利要求3-5中任意一项所述的编码胆固醇酯酶的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的重组载体，其特征在于，所述空载体选自由pUC19、pGEM和pBluescript所组成的组中。

8.根据权利要求6所述的重组载体，其特征在于，所述空载体为插入了质粒pCN51中的假单胞菌复制子基因的pUC19。

9.一种重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞含有权利要求6-7任意一项所述的重组载体。

10.根据权利要求9所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌JM109和/或恶臭假单胞菌。

11.一种从权利要求9或10所述的重组宿主细胞中纯化胆固醇酯酶的方法，其特征在于，所述方法采用将重组细胞的破碎液在45-65℃加热15-40分钟，然后在8000-15000rpm离心10-20min，以除去不耐热的杂蛋白。

12.一种检测血清总胆固醇的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下(a)-(d)中的至少一种：

(a)权利要求1或2所述的胆固醇酯酶；

(b)权利要求3-5中任意一项所述的胆固醇酯酶的核苷酸序列；

(c)权利要求6-8中任意一项所述的重组载体；

(d)权利要求9或10所述的重组宿主细胞。