[发明专利]一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法

权利要求书

1.一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合：将牛囊胚在含一抗的免疫染色液中，于4℃孵育10～16h，然后进行清洗；

2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色：

在避光条件下，将牛囊胚在含二抗的免疫染色液中，于室温避光孵育2h，然后进行清洗；

3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色：将牛囊胚在细胞核荧光染色液中，于室温避光孵育3～5min，然后进行清洗；

4)将牛囊胚放在载玻片上，用盖玻片压好，然后用荧光显微镜照相。

2.如权利要求1所述的牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，所述的一抗为抗CDX2小鼠单克隆抗体，二抗为Alexa Fluor555标记山羊抗小鼠IgG；用DAPI对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色。

3.如权利要求1所述的牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，所述的含一抗的免疫染色液是用免疫染色一抗稀释液将抗CDX2小鼠单克隆抗体稀释100～200倍；所述的含二抗的免疫染色液是用免疫荧光二抗稀释液将荧光标记的山羊抗小鼠IgG避光稀释500倍。

4.如权利要求1所述的牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，所述的清洗是将牛囊胚在PBS-PVA溶液中吹洗多次，每次3～5min。

5.如权利要求1所述的牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，其特征在于，所述的牛囊胚在与一抗进行免疫染色时，还进行以下预处理：

1)将牛囊胚在PBS-PVA溶液中吹洗多次，每次3～5min；所述的PBS-PVA溶液为含有体积浓度为0.2％PVA的PBS溶液；

2)将牛囊胚转移到免疫染色固定液中固定，于室温孵育1～2h或4℃孵育过夜；

3)将固定后牛囊胚转移到含有体积浓度为0.2％Triton X-100的PBS溶液中透化，孵育30～45min；

4)将牛囊胚在PBS-PVA溶液中吹洗多次，每次3～5min；

5)将牛囊胚转移到免疫染色封闭液中封闭，于4℃孵育10～12h；再将牛囊胚在PBS-PVA溶液中吹洗多次，每次3～5min；完成预处理。