[发明专利]一种β-半乳糖苷酶的突变体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201110247338.3 | 申请日： | 2011-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN102337254A | 公开（公告）日： | 2012-02-01 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;陈晟;吴玉飞;陈坚;夏泽华 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/38 | 分类号： | C12N9/38;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/14 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 王秀丽 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 半乳糖 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种β-半乳糖苷酶的突变体，其特征是将硫矿硫化叶菌（Sulfolobus solfataricus ）的β-半乳糖苷酶活性中心附近苯丙氨酸突变为酪氨酸，所述硫矿硫化叶菌的β-半乳糖苷酶的氨基酸序列与NCBI数据库中硫矿硫化叶菌的β-糖苷酶的基因lacS基因编码的氨基酸序列相同,lacS基因编号为AE006641。
2.权利要求1所述的突变体，其特征是第441位氨基酸苯丙氨酸突变为酪氨酸，命名为F441Y。
3.权利要求1所述的突变体的制备方法，其特征是在硫矿硫化叶菌β-半乳糖苷酶晶体结构的基础上确定突变位点；设计定点突变的突变引物，以携带β-半乳糖苷酶基因的载体为模板进行定点突变构建突变质粒；将突变质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞，挑选验证后的阳性单克隆进行发酵培养，25℃恒温培养至24 h，收集细胞、用缓冲液悬浮后，80℃水浴热处理30min，离心取上清，得到突变体F441Y。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述携带β-半乳糖苷酶的载体为pUC系列，pET系列，pT7-7，或pGEX中的任一一种。
5.权利要求1所述突变体的应用，其特征在于最适温度为70℃，最适pH为6.5，低聚半乳糖产量达到61%。
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