[发明专利]利用组织培养对彩叶丁香进行快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物种苗繁殖技术，具体地说是利用组织培养对彩叶丁香进行快速繁殖的方法。

背景技术

彩叶丁香(Syringa vulgaris L.)叶片带有洒金斑点，在阳光照射下非常醒目。它根系发达、植株长势旺盛，萌蘖力和抗旱能力较强，并且冬天落叶迟，是不可多得的城市绿化美化树种。但作为近几年从欧洲引进的一个新品种，可供扦插、嫁接的数目少，既限制了其繁殖速度，也不利于其优良性状的保持，因而无法满足日益增加的社会需求。利用植物组织培养技术产业化生产优质彩叶丁香种苗是解决这一生产问题的有效途径。然而同其它木本植物一样，玻璃化是其组织培养需要解决的难题之一，而且对于彩叶丁香这类观赏彩叶类树种，由于其有不少遗传学上的嵌合体，如一些镶嵌色彩的种子，带金边、银边、花叶植物，在培养过程中，嵌合体各组分可能分离，使杂色体的植物将显示出改变的形态或完全丧失杂色形状，从而更加大了培养难度。只有通过改良培养条件，达到兼顾提高繁殖量、保持遗传性状和减少玻璃化的目的，才能通过批量组培实现彩叶丁香的快速繁殖。

发明内容

本发明的目的就是提供一种利用组织培养对彩叶丁香进行快速繁殖的方法，既可快速繁殖，又能保证其遗传学特性、减少玻璃化发生率，以满足城市绿化美化的需求。

本发明是这样实现的：利用组织培养对彩叶丁香进行快速繁殖的方法包括以下步骤：

(1)外植体的采集与消毒：将除掉叶片的彩叶丁香的茎段依次进行清洗、紫外照射、酒精消毒，再放入0.1％HgC12溶液消毒灭菌5min，所述消毒灭菌液中加入占灭菌液重量百分比0.5％的吐温-80，最后用无菌水冲洗，再切成带2-3个腋芽的1～1.5cm长的茎段；

(2)将前步所得茎段接种到外植体诱导培养基：MS+6-BA0.1mg/l+NAA0.01mg/l，彩叶丁香芽苗诱导30天至小芽长4-5cm长；

(3)将前步所得小苗转入继代培养基培养20天，在组培的前10代，所述继代培养基为：MS+6-BA1.0mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l；从第11代起所述继代培养基为：1/2MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l；从第17代起所述继代培养基为：1/2MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.1mg/l+Vc0.5g/l+硫酸庆大霉素4万单位/1；

(4)取2-3cm长的无根幼苗转入生根培养基中：1/2MS+NAA0.1mg/l，培养40天；

(5)将培养瓶置于温室中自然光炼苗2-3天后，将生根幼植株取出并在0.1％的高锰酸钾溶液中进行漂洗；

(6)漂洗后的生根幼株种植于栽培基质并放于大棚内培养，单株套透明塑料袋，保持90％的相对湿度，光照强度为2000-4000lux；一周后弃袋；所述栽培基质为消毒灭菌后的草炭；当小苗长至20-30cm时移栽至大田苗圃进行栽植。

本发明第(1)步中，在对外植体的灭菌中，在灭菌剂中加入吐温-80可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果，在0.1％HgC12溶液中加入0.1％的吐温-80，污染率随着吐温-80的增加逐渐降低，而枯死率则随吐温-80的增加逐渐增高，即加入吐温会对材料的伤害也在增加，所以应注意用量和灭菌时间。综合分析，加入灭菌液的0.5％，即在100ml灭菌液中加入15滴吐温-80，使药剂更易于展布，更容易浸入到灭菌的材料表面。污染率随灭菌时间的延长逐渐降低，而枯死率则随灭菌时间的延长逐渐增高。综合分析以上结果表明，用0.1％HgC12，灭菌5min成活率可达80％，效果最好，时间太长，材料容易死亡，时间太短灭菌不彻底，易造成污染。

本发明第(2)步中，彩叶丁香腋芽在第10天就开始萌动，15天伸长并长出嫩叶，30天茎段芽点诱导成高4-5cm，具有8余片叶子的芽苗。

本发明第(3)步中，按组培代数不同，选择不同的培养基，以兼顾控制褐化、不影响增殖率和减少玻璃化三方面，从而达到效益最大化。

本发明第(4)步中，取2-3cm长的无根幼苗转入生根培养基中，大约12d左右开始生根，培养40天后，根系主根粗壮，侧根发达，苗壮，叶绿，长势好，试管苗小苗长至5cm以上时，几乎占满整个接种瓶，这时即可进行移栽。

本发明第(5)步中，试管苗移栽前，炼苗2-3天，此时可适当加大光照，以提高小苗的木质化程度。用0.1％的高锰酸钾溶液中进行漂洗，不仅可以洗去组培苗上的培养基而且也对小苗进行了杀菌处理并且没有药害的产生。