[发明专利]猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒检测用引物、探针及检测试剂盒

权利要求书

1.一组检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核苷酸引物和探针，其特征在于，所述核苷酸引物和探针为序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6，其中序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别为检测猪传染性胃肠炎病毒的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：3为检测猪传染性胃肠炎病毒的荧光探针，序列SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5分别为检测猪流行性腹泻病毒的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：6为检测猪流行性腹泻病毒的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核苷酸引物和探针，其特征在于：所述探针SEQ ID NO：3的5’端标记报告荧光基团JOE，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

3.根据权利要求1所述的检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核苷酸引物和探针，其特征在于：所述探针SEQ ID NO：6的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

4.一种猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测试剂盒，其特征在于，由以下组分组成：

1）RNA提取试剂；

2）RNA标准品：为猪传染性胃肠炎病毒体外转录的RNA片段，其对应的DNA序列为序列表SEQ ID No：9；和猪流行性腹泻病毒体外转录的RNA片段，其对应的DNA序列为序列表SEQ ID No：12；

3）实时定量RT-PCR反应液，其包括：含有dNTP的RT-PCR缓冲液，检测猪传染性胃肠炎病毒的正义引物、反义引物和荧光探针，检测猪流行性腹泻病毒的正义引物、反义引物和荧光探针，Taq DNA聚合酶，反转录酶，荧光定量PCR参比染料；

4）阴性对照：DEPC水；

5）DEPT水；

其中，检测猪传染性胃肠炎病毒的正义引物为序列表SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，反义引物为序列表SEQ ID No：2所示的核苷酸序列，荧光探针为序列表SEQ ID No：3所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团JOE，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA；检测猪流行性腹泻病毒的正义引物为序列表SEQ ID No：4所示的核苷酸序列，反义引物为序列表SEQ ID No：5所示的核苷酸序列，荧光探针为序列表SEQ ID No：6所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

5.根据权利要求4所述的猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂为RNA提取试剂盒。

6.根据权利要求4所述的猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述实时定量RT-PCR反应液包括：1×含有dNTP的RT-PCR缓冲液，检测猪传染性胃肠炎病毒的正义引物0.2μM、反义引物0.2μM和荧光探针0.4μM，检测猪流行性腹泻病毒的正义引物0.2μM、反义引物0.2μM和荧光探针0.4μM，Taq DNA聚合酶2U，反转录酶5U，1×荧光定量PCR参比染料。

7.根据权利要求6所述的猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测试剂盒，其特征在于，所述含有dNTP的RT-PCR缓冲液为One Step RT-PCR Buffer，所述荧光定量PCR参比染料为ROX Reference Dye，所述Taq DNA聚合酶为TaKaRa Ex Taq^TM HS，所述反转录酶为PrimeScript^TMRT Enzyme MixⅡ。