[发明专利]一种制备饲养层细胞的方法无效
| 申请号： | 201110237372.2 | 申请日： | 2011-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN102277329A | 公开（公告）日： | 2011-12-14 |
| 发明（设计）人： | 乔杰;闫丽盈;于洋;李蓉;严杰;张妍;靳红艳 | 申请（专利权）人： | 北京大学第三医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/073;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100191 北京市海淀区花*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 饲养 细胞 方法 | ||
1.一种制备饲养层细胞的方法，包括如下步骤：
(1)将离体的成纤维细胞用10μg/ml丝裂霉素C处理，分别收集培养液上清和贴壁细胞；
(2)将离体的成纤维细胞用前一步骤收集的培养液上清处理，收集贴壁细胞；
在所述步骤(1)和所述步骤(2)之间还包括0至2次的如下步骤：将离体的成纤维细胞用前一步骤收集的培养液上清处理，分别收集培养液上清和贴壁细胞；
以上每一步骤得到的贴壁细胞均为饲养层细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述成纤维细胞在含10μg/ml丝裂霉素C的完全培养基中进行所述处理。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)，和/或所述步骤(2)，和/或所述步骤(1)和所述步骤(2)之间的步骤中，所述处理的条件为37℃、5％CO2培养箱中培养2.5h。
4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：在进行所述方法前，所述成纤维细胞先进行传代；用传代后的成纤维细胞进行所述步骤(1)，和/或所述步骤(2)，和/或所述步骤(1)和所述步骤(2)之间的步骤。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述传代的方法如下：将所述成纤维细胞进行消化后培育2-4天，然后进行(1∶3)-(1∶5)传代。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述成纤维细胞进行所述消化后培育2-4天后达到的细胞密度为80-90％。
7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将所述贴壁细胞进行消化的步骤；所述方法优选包括如下步骤：将每一步骤得到的所述贴壁细胞消化后立即于4℃放置30分钟，然后置于-80℃。
8.如权利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述成纤维细胞为小鼠胚胎成纤维细胞；所述饲养层细胞为用于培养胚胎干细胞的饲养层细胞。
9.权利要求1至8中任一所述方法得到的饲养层细胞。
10.权利要求9所述饲养层细胞在培养胚胎干细胞中的应用。
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