[发明专利]一种精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检验测定技术领域，涉及一种体外诊断用试剂盒及其应用，具体地说是一种精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒及其应用。

背景技术

精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶(简称γ-L-谷氨酰基转肽酶)主要来源于前列腺，其含量约是血清中的200-500倍，其活性的检测可用于评价前列腺的功能；另外，精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶是谷胱甘肽代谢的关键酶，在保护精子免受氧自由基损害方面也起着非常重要的作用。在前列腺功能低下患者中，其γ-L-谷氨酰基转肽酶活性明显下降；在前列腺癌以及前列腺良性增生患者中，其活性显著增高。

目前，检测精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶的方法主要是化学比色法，该法多为手工或半自动操作，由于其活性过高，样本需要预稀释，加样程序多，操作步骤复杂，试剂和样品混匀一定的时间后，通过分光光度计逐一比色测定，再根据公式计算出结果，不但耗时耗材耗力，不符合规模效益，而且人为误差也比较大，结果一致性不是很好。

现在，临床生化检验基本上都实现了自动化分析。全自动生化仪就是将原始手工操作过程中的取样、混匀、温育、检测、结果计算、判断、显示和打印结果及清洗等步骤全部或者部分自动运行，由于其测量速度快、准确性高、消耗试剂量小，现已在防疫站、各级医院、计划生育服务站得到了广泛使用，配合使用可大大提高常规生化检验的收益及效率。遗憾的是，截止到目前，无论是国外还是国内，对于精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶项目的检测，除了早期的科研成果外，尚没有一种可与全自动生化仪相配套的、商品化的检测试剂盒问世，因此，建立一种与全自动生化仪相配套使用的精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒及检测方法就显得尤为迫切和重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，填补市场上的空缺，提供一种与全自动生化仪相配套使用的精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供所述精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒在检测精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；其中，R1试剂包括含量的组份：100-200mmol/L、pH8.0-8.3三羟甲基氨基甲烷缓冲液、90-110mmol/L双甘氨肽和0.01-0.1％防腐剂；R2试剂包括以下含量的组份：100-200mmol/L、pH8.0-8.3三羟甲基氨基甲烷缓冲液、0.5-3.0mmol/L底物和0.01-0.1％防腐剂；其中，所述底物为L-γ-谷氨酰基-p-硝基苯胺或L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺；所述的防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素或ProClin系列防腐剂中的任何一种。

所述的精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒在测定精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性中的应用。

所述的精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒在测定精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性中的应用，包括如下步骤：

1)样品制备：新鲜精液液化后通过3000～5000rpm离心10～20min，所获得的上清液即是；

2)在全自动生化仪的操作软件上输入基本参数如下：

检测项目：γ-GT；

样品试剂比：1∶100；

检测方法：速率法；

定标方法：因子法；

主波长：405-410nm；

反应方向：上升；

反应时间：36-54秒；

检测时间：90-120秒；

3)定标操作：采用因子法定标，直接输入理论因子F值即可；

4)样本检测：

将制备好的精浆样本和R1试剂、R2试剂放在全自动生化仪的相应位置上，全自动生化仪根据理论因子计算出样本中γ-L-谷氨酰基转肽酶的活性：

酶活性单位U定义：在上述反应条件下，每分钟释放1μmol p-硝基苯胺所需的酶量为一个酶活性单位；

精浆中γ-L-谷氨酰基转肽酶活性(U/L)＝ΔA/min×F；

其中，ΔA/min即每分钟吸光度的变化率，F为已知。

所述R1试剂为液体溶液，所述缓冲溶液为PH8.0-8.3的Tris缓冲液，用于为反应提供适宜的反应条件；R1试剂中，双甘氨肽是与γ-L-谷氨酰基转肽酶催化足量底物分解产生的L-γ-谷氨酰基的有效结合量，用作L-γ-谷氨酰基的受体。