[发明专利]一种精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；其中，R1试剂包括以下含量的组份：100-200mmol/L、pH8.0-8.3三羟甲基氨基甲烷缓冲液、90-110mmol/L双甘氨肽和0.01-0.1％防腐剂；R2试剂包括以下含量的组份：100-200mmol/L、pH8.0-8.3三羟甲基氨基甲烷缓冲液、0.5-3.0mmol/L底物和0.01-0.1％防腐剂；

其中，所述底物为L-γ-谷氨酰基-p-硝基苯胺或L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺；所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素或ProClin系列防腐剂中的任何一种。

2.权利要求1所述的精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性定量检测试剂盒在测定精浆γ-L-谷氨酰基转肽酶活性中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

1)样品制备：新鲜精液液化后通过3000～5000rpm离心10～20min，所获得的上清液即是；

2)在全自动生化仪上输入基本参数如下：

检测项目：γ-GT；

样品试剂比：1∶100；

检测方法：速率法；

定标方法：因子法；

主波长：405-410nm；

反应方向：上升；

反应时间：36-54秒；

检测时间：90-120秒；

3)定标操作：

采用因子法定标，直接输入理论因子F值即可；

4)样本检测：

将制备好的精浆样本和R1试剂、R2试剂放在全自动生化仪的相应位置上，全自动生化仪根据理论因子计算出样本中γ-L-谷氨酰基转肽酶的活性；

酶活性单位U定义：在上述反应条件下，每分钟释放1μmol p-硝基苯胺所需的酶量为一个酶活性单位；

精浆中γ-L-谷氨酰基转肽酶活性(U/L)＝ΔA/min×F；

其中，ΔA/min即每分钟吸光度的变化率，F值为已知。