[发明专利]一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及糖胺聚糖，尤其是一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法。

背景技术

目前糖胺聚糖(GAG)的提取方法主要有三种：第一非降解法，指用水或盐溶液从动、植物组织中提取糖胺聚糖的方法；第二碱提取法，基于蛋白多糖中糖肽键对碱的不稳定性，用碱提法使糖与蛋白质分开；第三酶降解法，蛋白酶将蛋白聚糖的蛋白质部分降解，使糖链得到分离，三种方法中以酶降解法效果最好，因其条件温和，且符合目前节能减排的需要。然而，即使同属于酶降解法，由于不同提取材料所含的糖胺聚糖的组成、含量和功能活性不同，提取方法有异，况且还需考虑到生产上的推广应用。本发明选取渤海湾最常见的低值贝类———泥螺为原材料，提取，分离，纯化糖胺聚糖，以期为医药、保健品行业提供优质原材料，为海珍动物养殖提供优良的免疫增强剂。

通过检索，发现如下三篇与本专利申请相关的公开专利文献：1、本发明提供了一种生产包括糖胺聚糖的组合物的方法(CN102124032A)，所述的方法包括利用膜吸附器形式层析基质将包括糖胺聚糖的动物材料匀浆进行层析。2、一种具有血管保护效应的活性物质——栉孔扇贝糖胺聚糖的提取制备方法(CN1746191)，其提取制备工艺如下：将栉孔扇贝内脏团称重，加水制成匀浆液，在匀浆液中加入蛋白酶，加热反应得酶解液；将酶解液在离心机中离心，弃去沉淀物，对离心液加二次乙醇溶液，形成沉淀；将分离后的沉淀物加蒸馏水配成水溶液后加热并加入活性炭，冷却后经离心，收集上清液，对上清液抽滤，得清液；将清液用滤膜超滤，得分子量为5k～100k的滤液；将滤液冷冻干燥即制得栉孔扇贝糖胺聚糖。该方法操作简单、反应条件温和、成本低廉、得率及纯度高，在提取糖胺聚糖的同时还可大量回收蛋白质，有利于栉孔扇贝内脏团的综合利用，提取的物质对于防治心脏血管性疾病有重要价值。3、一种玉足海参糖胺聚糖的提取方法(CN101624426)，方法：一、玉足海参粉与纯化水混合，经酶解和离心后得沉淀A；二、沉淀A与纯化水混合，经加热、和离心后得沉淀B；三、沉淀B与纯化水混合，离心取沉淀用纯化水溶解，经离心和洗涤得沉淀C；四、沉淀C与缓冲液混合，经层析、洗涤、洗脱和离心后得沉淀D；五、沉淀D与生理盐水混合，经离心后得沉淀E；六、沉淀E与注射用水混合，透析或超滤截流后取固相产物，冷冻干燥后即得。本发明提取的玉足海参糖胺聚糖质量纯度高达93％～99％，能够直接用于制备注射剂。

通过比对，上述公开专利文献的技术方案及提取客体均与本专利申请有本质的不同，本专利申请具有新颖性。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种从泥螺中提取高纯度糖胺聚糖的方法，该方法的原料来源充足、提取成本低，为满足医药、保健品行业及海珍动物养殖业的广泛应用提供了可能。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种从泥螺中提取糖胺聚糖的方法，提取包括以下步骤：

(1)原料处理：将泥螺去壳，软体部分洗净后，加入2-2.5倍体积的蒸馏水匀浆，形成匀浆液；

(2)酶解：向上述匀浆液中加胰蛋白酶，在45℃水浴条件下酶解7-8小时，酶解液煮沸灭酶后，4000r/min离心10min，取上清液；

(3)脱色：加入双氧水脱色；

(4)调pH值去沉淀：先用HCl调pH至2.0，离心除去沉淀；再用NaOH调pH至7.0，离心除去沉淀；

(5)醇沉法提取粗糖胺聚糖：上清液在不断搅拌下缓缓加入乙醇至醇含量为60％，于4℃条件下静置24小时，移去上清液，4000r/min离心10min后回收粗糖胺聚糖；

(6)超滤：将粗糖胺聚糖溶于蒸馏水，配成1％糖液，4000r/min离心10min除去不溶物后进行超滤；

(7)溶液络合后解离：加入3倍体积的5％CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，40℃下沉淀1-2小时，8000r/min离心30min，收集沉淀，40℃下将沉淀溶于2mol/L的NaCl溶液，使GAG-CTAB络合物解离，形成解离液；

(8)醇沉、超滤、再醇沉：上述解离液加入乙醇，使醇量达60％，8000r/min离心10min，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水，用中空纤维膜超滤，在超滤后的溶液中加入乙醇-乙酸钠试剂，使醇量达60％，按醇沉法回收糖胺聚糖，将沉淀物烘干，即制得纯泥螺糖胺聚糖。

而且，所述步骤(2)中胰蛋白酶的添加量为匀浆液总重量的0.8-1％。

而且，所述步骤(3)中双氧水的添加量为上清液重量的6-8％。

本发明的优点和积极效果是：