[发明专利]一种检测猪博卡病毒的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测猪博卡病毒的试剂盒，其特征在于它含有：

（1）荧光PCR反应液，所述的荧光PCR反应液中含有特异性引物，其上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示；

（2）针对猪博卡病毒的TaqMan特异性探针，探针的序列如SEQ ID NO：3所示，在探针的5’设计有荧光物质，在探针的3’设计有淬灭物质；

（3）博卡病毒质粒的DNA阳性对照。

2.根据权利要求1所述的一种检测猪博卡病毒的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物的浓度为0.2μM。

3.根据权利要求1所述的一种检测猪博卡病毒的试剂盒，其特征在于：所述的荧光PCR反应液含有浓度均为200μM的dATP、dTTP、dGTP和dCTP，还含有浓度为3.5mM的Mg²⁺。

4.根据权利要求1所述的一种检测猪博卡病毒的试剂盒，其特征在于：还含有热启动Taq酶，所述的热启动Taq酶的终浓度为0.03U/μL。

5.根据权利要求1所述的一种检测猪博卡病毒试剂盒，其特征在于：在探针的5’设计有FAM荧光物质，在探针的3’设计有带有BHQ的淬灭物质。

6.一种用于检测猪博卡病毒的特异性引物，其特征在于：其上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示。

7.一种用于检测猪博卡病毒的TaqMan特异性探针，其特征在于：其碱基序列如SEQ ID NO：3所示。

8.一种采用权利要求1所述的试剂盒检测猪博卡方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）待检样本的DNA提取；

（2）荧光PCR检测：按照扩增对象数量，取荧光PCR反应液、探针Taq酶混于一离心管中，震荡，分装，盖上管盖备用；将阴性对照液加入一个分装管中，取各样本的DNA加入对应反应管中，最后取阳性对照加入一反应管中，各反应管标记后离心，取出置荧光PCR仪中进行检测；

（3）结果判定：反应液测定Ct值均大于35或无数值的标本为阴性；FAM通道测定Ct≤30的标本为阳性标本；测定30＜Ct＜35的标本建议复测，复测结果Ct＜35为阳性，复测结果Ct≥35的为阴性。

9.如权利要求8所述的一种检测猪博卡病毒的方法，其特征在于荧光PCR扩增条件为：94℃预变性3min；按以下参数循环40次：94℃变性20sec、60℃采集荧光40sec。