[发明专利]从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺

权利要求书

1.一种从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：依照下列步骤完成：

(1)在新鲜的动物血液中加入柠檬酸钠做抗凝处理，离心收集红细胞，然后加入红细胞体积1-3倍的去离子水，不断搅拌，使红细胞破碎，得溶血液；

(2)向溶血液中加入单价中性金属盐，调节PH值到4.0-7.0，加热至55-75℃，保温反应30-100min，冷却至室温，离心取上清，得SOD粗提液；

(3)用中空纤维超滤装置对SOD粗提液进行超滤浓缩得SOD浓缩液；

(4)向SOD浓缩液中边搅拌边缓慢加入0.4-1倍体积的预冷丙酮，离心取上清液；

(5)然后向步骤(4)所得的清液中边搅拌边缓慢加入1.2-1.5倍体积的预冷丙酮，离心取沉淀；

(6)将沉淀用去离子水溶解，经过阴离子交换树脂或分子筛层析，冷冻干燥即可得SOD精品冻干粉。

2.根据权利要求1所述的从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：上述抗凝处理时所使用的抗凝剂为食品级柠檬酸钠，添加量为3.5-5g/Kg动物血，搅拌溶血时间30-120min。

3.根据权利要求1所述的从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：上述单价中性金属盐可以是碱金属的氯化物、溴化物、硝酸盐和硫酸盐中的任一种或几种的混合物，至其终浓度为0.1-1.5mol/L。

4.根据权利要求1所述的从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：上述步骤(3)使用的中空纤维超滤装置选择截留分子量为4K-15K的膜组件，保持回流压0.04-0.1MPa。

5.根据权利要求1所述的从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：上述步骤(6)中使用的阴离子交换层析是DEAE阴离子交换层析，层析柱先用pH6.5～8.0的2.5mM的磷酸缓冲液平衡，至280nm无光吸收，然后上样，换用单一浓度的洗脱液洗脱至280nm无光吸收，收集SOD活力峰。其中的单一浓度洗脱液为与平衡层析柱的缓冲液pH相同、浓度为4～8mM的磷酸缓冲液。

6.根据权利要求1所述的从动物血球液中提取超氧化物歧化酶SOD的新工艺，其特征在于：上述步骤(6)中使用的分子筛柱层析是Sephadex G100或Sephadex G25柱层析，层析柱先用蒸馏水平衡，然后上样，再以蒸馏水洗脱，收集SOD活力峰。