[发明专利]壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及了一种壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的制备方法。

背景技术

目前在临床上使用最广泛的抗凝剂是肝素，但是它价格昂贵，不易获得，且使用时容易出现副作用。在医药领域迫切需要研制价格低廉，方便易得，抗凝效果好的抗凝剂来满足医用需求。壳聚糖广泛存在于蚕蛹等动物的外表皮中，无毒、无刺激、可自然降解，具有良好的组织相容性和较高的生物活性，完全符合医用的条件。且壳聚糖分子上有许多活泼基团，容易进行化学改性。

因此，研究壳聚糖甘氨酸衍生物具有重大的理论和实际意义，若衍生物有抗凝活性，便找到了一种可能替代肝素的新型抗凝剂，为开发新型壳聚糖基抗凝血材料开辟了新的途径，给其它壳聚糖的改性提供了依据，对医药研发也有指导意义。

发明内容

本发明为了将甘氨酸分子接枝到壳聚糖分子上，形成对血液中的钙离子有螯合作用的化合物，通过对不同脱乙酰度的壳聚糖进行反应，提供一种壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的制备方法。

为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：

壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)衍生物反应中间体的合成：

取摩尔比为1∶1-1.5的甘氨酸和氢氧化钠，在三角瓶中用氢氧化钠溶液中和甘氨酸至pH＝9.0，制得甘氨酸钠溶液，向三角瓶中缓慢加入与甘氨酸等摩尔的环氧氯丙烷，室温下充分搅拌，水浴控制反应在40-50℃搅拌15-45min，至溶液变为淡黄色的澄清液体，盐酸中和至中性，产物倒入丙酮，进行脱水、重结晶，乙醇洗涤，旋转蒸发仪蒸干后，真空干燥得到反应中间体COOH-CH₂-NH-CH₂-CH(OH)-CH₂-Cl；

(2)壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的合成：

取摩尔比为1∶1-2的壳聚糖和反应中间产物，将壳聚糖加入到质量分数为40％-60％的氢氧化钠水溶液，在-16--20℃冰箱碱化1天，壳聚糖完全溶胀后，加入上述中间体，58-62℃搅拌2-4h，过滤除去未反应的中间体，用丙酮脱水，30％-70％乙醇洗涤至pH＝7，真空干燥后得壳聚糖甘氨酸衍生物C₆H₁₁NO₅-CH₂-CH(OH)-CH₂-NH-CH₂-COOH。

本发明的技术特点是将氨基酸的氨基端接到含氯原子的烷基化合物上，然后和壳聚糖C₆上的的羟基发生威廉逊合成反应，制成本发明产物。由于壳聚糖C₃和C₆上的-OH及其C₂上的-NH₂都能发生取代反应，但是由于C₃上的空间位阻效应，以及C₂和C₃分子间的氢键作用，使C₃位上较难发生取代反应，而是以C₆位上的取代反应为主。对于C₆-OH和C₂-NH₂来说，在碱性条件下，羟基上的取代反应活性要高于氨基上的取代活性，因此可以通过控制反应条件——在高浓度碱性(40％-60％)条件下，来控制壳聚糖的反应位点的活性差异，以制备C₆-OH羧基化衍生物。

本发明的结构单元为C₆H₁₁NO₅-C₆H₁₂NO₄，其中C₆H₁₁NO₅为壳聚糖的骨架结构，C₆H₁₂NO₄为甘氨酸化合物。

本发明的有益效果：

本发明工艺简单，操作方便，所制备的抗凝血剂具有优良的抗凝血性能，其原料具有良好的生物相容性，可以自然降解，没有毒性和刺激性，可以应用于临生物医药等领域，本发明具有体外抗凝血效果，1mg/ml的衍生物可以使血液凝固时间延长至132秒。

具体实施方式

实例例1：壳聚糖甘氨酸抗凝血类衍生物的制备方法，包括以下步骤：