[发明专利]核酸检测

权利要求书

1.一种测定样品中靶核酸和参比核酸哪一种以更多量存在的方法，包括：

(a)通过使用靶的正向引物和反向引物以及参比的正向引物和反向引物的聚合酶链反应扩增靶和参比核酸，其中参比的反向引物包含与靶序列的一部分相同的尾部序列；

(b)添加与靶的反向引物互补的第一破坏序列，并添加与参比的反向引物的一部分但非尾部序列互补的第二破坏序列；和

(c)检测单链靶或参比的存在，其中单链靶的存在表明更多量的靶存在于原始样品中，而单链参比的存在则表明更多量的参比存在于原始样品中。

2.权利要求1的方法，其中该方法进一步包括，在添加第一和第二破坏序列后，但在检测步骤前：

使靶的反向引物退火至靶的互补物；使参比的反向引物退火至参比的互补物；和使参比的反向引物的尾部序列退火至靶；以及

延伸靶和参比的反向引物以及参比的反向引物的尾部序列；其中靶的互补物、参比的互补物以及靶的至少一部分和参比的至少一部分各自转变为双链产物，而任何过量的靶或参比则仍保持单链。

3.权利要求2的方法，其中双链核酸包含卤代核苷酸。

4.权利要求1的方法，其中在添加第一和第二破坏序列后，但在检测步骤前，交联双链核酸。

5.权利要求4的方法，其中使用紫外线进行交联。

6.权利要求4的方法，其中使用化学交联剂进行交联。

7.权利要求6的方法，其中化学交联剂选自丝裂霉素、嗜癌霉素、比折来新、氮芥、纺锤菌素以及它们的衍生物。

8.权利要求1的方法，其中利用聚合酶链反应进行检测步骤。

9.权利要求1的方法，其中利用荧光、毛细管电泳、放射性或酶活性进行检测步骤。

10.权利要求1的方法，其中样品为生物样品。

11.权利要求10的方法，其中生物样品选自血液、血清、血浆、活检标本、拭子、涂片、细胞培养物、RNA和cDNA。

12.权利要求1的方法，其中样品不是生物样品。

13.权利要求10的方法，其中样品获得自孕妇。

14.权利要求13的方法，其中靶或参比核酸序列是胎儿核酸序列。

15.权利要求14的方法，其中靶和参比核酸序列的量之间的差异与胎儿中的染色体异常有关。

16.权利要求15的方法，其中差异与胎儿中的唐氏综合征有关。

17.权利要求15的方法，其中差异与胎儿中的特纳综合征、爱德华综合征、帕韬综合征、克兰费尔特综合征、X三体综合征或XYY综合征有关。

18.权利要求1的方法，其中靶和参比核酸序列的量之间的差异与非整倍性有关。

19.权利要求18的方法，其中非整倍性与癌症有关。