[发明专利]畜禽血制备多肽液的方法

权利要求书

1.一种畜禽血制备多肽液的方法，其特征是：该方法包括如下步骤：

(1)菌种活化：将枯草芽孢杆菌在无菌条件下(以下接种均在无菌条件下进行)，接种于LB固体斜面培养基上37℃培养24h，从斜面培养基上用接种环挑取一环菌种，接种于LB平皿培养基上37℃培养24h，这样活化2-3代，再从平皿中挑取两环菌种接种于LB液体培养基中，在37℃、120rpm条件下，摇床发酵24h，所得的菌液冷藏备用，将上述冷藏菌液接种于LB固体斜面培养基37℃培养24h，所得菌种即为经活化的枯草芽孢杆菌；

(2)种子培养基制备：准确量取1000mL蒸馏水，称取牛肉膏3g于小烧杯中，向其中加少许蒸馏水，用玻棒搅拌使其溶解，再向烧杯中入已溶解的牛肉膏和剩下的蒸馏水，玻棒搅拌，使其溶解，调节pH值至7.2，在121℃，20min条件下灭菌备用；

(3)种子液菌体生长曲线测定：从活化后的菌种保藏斜面中以无菌操作挑取两环接种于种子培养基中，37℃，120rpm，每隔4h取一次样(5mL)，高速离心沉淀菌体(1600rpm，20min)，去除上清液后，菌体沉淀以无菌蒸馏水悬浮，混匀定容至10mL，以未接菌种的种子液做参比溶液，于560nm处测定吸光度，然后以时间为横坐标，所测菌种的吸光度值为纵坐标，绘制生长曲线；

(4)种子液菌体数测定：采用血球计数法对种子液中菌落总数进行计算，单位个/mL，计算1mL种子液中所含菌量；

(5)发酵：按畜禽血的1-9g加入枯草芽孢杆菌种子液1-9mL，置于温度28～36℃、PH值5～9的条件下，发酵24～48小时，所得多肽液于90℃下，加热灭活5～15min。