[发明专利]一种高灵敏度免疫芯片检测系统及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高灵敏度蛋白芯片检测系统及其使用方法，属于生物芯片技术领域。

背景技术

在现代血清学检测技术中，除了ELISA法之外，还经常采用放免法以及化学发光法等。ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用，特别是用于各型肝炎标志物的检测。但ELISA法由于操作程序复杂，时间较长，且需要价格昂贵的酶标仪等实验室非通用设备。ELISA法需时较长的主要原因，是由于液相中的抗原（或抗体）需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应不适当地缩短反应时间，将使灵敏度降至临床要求以下。一步法快速检测试剂盒，虽可提高检测速度，但有出现假阴性结果的弊端。放免法只能进行单一指标的检测，单个指标检测也需要2～4h，也需要价格昂贵的R-计数器等专用设备，且存在着放射性衰减和污染。化学发光检测时间短且灵敏度高，但仍是标记方法的间接判读结果，未引入分子量等更为客观的结果判读体系，检测正确度易受影响，对每种指标的检测需专供设计，如多种抗体的检测存在检测时间长、成本较高的问题，不利于基层临床检验活动的开展。

发明内容

本发明的目的是为解决现有技术中存在的问题，提供一种高灵敏度蛋白芯片检测系统，该系统用于检测时具有检测速度快、灵敏度高的优点，它不需要荧光扫描仪等昂贵的设备，不需复杂的操作，不受实验条件的限制，在操作完成后即可直接或间接观察结果，大大缩短检测时间和劳动强度。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种高灵敏度蛋白芯片检测系统，它包括芯片反应系统和显色系统；芯片反应系统包括载体、反应液和洗涤液；显色系统包括检测液和终止液；

所述载体上包被有能与生物学指标特异性结合的探针点阵或质控点；

反应液包括两种，一种为能与生物学指标结合的生物素标记物，另一种为过氧化物辣根酶与链霉亲和素的复合物；或者

反应液为过氧化物辣根酶标记的能与生物学指标相结合的物质；

终止液为0.01～10.0（w/v）%的叠氮钠溶液。

本发明上述技术方案中，与生物学指标可特异性结合的物质可以是抗原、抗体、SPA蛋白、羊抗检测样本来源种属IgG、鼠抗检测样本来源种属IgG、其他动物免疫的抗检测样本来源种属IgG、生物学指标的多克隆抗体等。

本发明上述技术方案中，所述载体可以是羧基化等修饰后的载体，一般未修饰的载体其连接方式是物理吸附，修饰后的载体其连接方式是共价键结合；但无论是物理吸附和共价键结合均不会对本发明的检测产生本质影响。

作为上述技术方案的优选，所述洗涤液的配方如下：0.1～10（v/v）%的TWEEN-20、0.01～0.2摩尔每升pH6～8的 PB缓冲液、0.1～20（v/v）%的proclin300。

作为上述技术方案的优选，所述检测液包括pH4～7的A液和pH2～7的B液，A液包括H2O2和柠檬酸-磷酸氢二钠溶液，B液包括TMB-HCl和柠檬酸钠-盐酸溶液；其中，H₂O₂浓度为0.005～0.5（v/v）%、柠檬酸-磷酸氢二钠溶液浓度为0.01～0.2摩尔每升；柠檬酸钠浓度为0.01～0.1摩尔每升，B 液中TMB-HCl的浓度为0.01～1.0毫克每毫升。

作为上述技术方案的优选，所述载体为孔径在0.1～12微米的多孔性微孔滤膜。

作为上述技术方案的优选，所述多孔性微孔滤膜为纤维素类微孔滤膜、尼龙类微孔滤膜或聚氟乙烯类微孔滤膜。

所述纤维素类微孔滤膜是指硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、醋酸纤维素与硝酸纤维素的混合物制成的膜、纤维素膜、玻璃纤维素膜等。

所述聚氟乙烯类微孔滤膜是指具偏氟乙烯膜和具四氟乙烯膜等。

作为上述技术方案的另一种优选，所述载体还可以是聚乙烯、聚苯乙烯、硅橡胶或玻璃材料制成的各种可用于生物学检测的承载体。

本发明的另一个目的是提供一种高灵敏度蛋白芯片检测系统的使用方法，它包括以下步骤：

1）蛋白反应芯片的制作

用点样仪将一种或多种能与生物学指标结合的探针溶液或质控点以点阵的形式固化于载体上，室温干燥，2～8℃密封保存；

2）点样稀释液的配制

配制浓度为0.01～0.5摩尔每升的PB缓冲液，其中含有浓度为0.01～20%的水溶性色素；

3）封闭液的配制