[发明专利]CSFV、PCV2与PRV多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物及其检测方法有效
| 申请号: | 201110221771.X | 申请日: | 2011-08-04 | 
| 公开(公告)号: | CN102382902A | 公开(公告)日: | 2012-03-21 | 
| 发明(设计)人: | 魏战勇;胡慧;刘芳;崔保安;宋亚鹏;韩志涛 | 申请(专利权)人: | 河南农业大学 | 
| 主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 | 
| 代理公司: | 郑州中原专利事务所有限公司 41109 | 代理人: | 张绍琳 | 
| 地址: | 450002*** | 国省代码: | 河南;41 | 
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | csfv pcv2 prv 多重 sybr green 实时 荧光 pcr 引物 及其 检测 方法 | ||
1.CSFV、PCV2与PRV多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物,其特征在于:
CSFV引物的序列如下:
上游引物P1:5′-AAACGGAGGGACTAGCCGT-3′;
下游引物P2:5′-TGCCATGTACAGCAGAGA-3′;
PRV引物的序列如下:
上游引物P3:5′-CTCGCCATCGTCAGCAA-3′;
下游引物P4:5′-GCTGCTCCTCCATGTCCTT-3′;
PCV2引物的序列如下:
上游引物P5:5′-GGGCCAGAATTCAACCTTACCC-3′;
下游引物P6:5′-CGCACCTTCGGATATACTGTCA-3′。
2.利用权利要求1所述引物检测CSFV、PCV2与PRV的多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法,包括提取病毒的DNA后,按如下SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR反应体系和反应条件对病毒进行检测,其特征在于:
所述SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR反应体系,在25μl体系中加入以下成份:
所述反应条件为:95℃预变性1min;进入循环,95℃变性10s,58℃退火15s,72℃延伸15s,40个循环,循环结束后升温至95℃15s,再降至65℃15s,开始从65℃递增至94℃,采集荧光信号得出扩增产物的溶解曲线,于95℃15s结束反应。
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