[发明专利]一种从混合植物甾醇中分离制备甾醇单体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化工或者精细化工领域，具体涉及一种从混合植物甾醇中分离制备多种甾醇单体的方法。

背景技术

天然植物甾醇是一类存在于植物中的天然活性物质，是以环戊烷全氢菲为主体骨架（甾核）的甾体化合物，C-3β位为醇羟基，环结构上通常有双键，在结构上与胆固醇相似。根据双键位置在甾核环结构上的C5-C6位和C7-C8位不同，可以将它们分为Δ5-植物甾醇和Δ7-植物甾醇等大类，而由于侧链的细微差别或C4位是否有甲基也代表了不同的植物甾醇。可以说，官能团或化学键的不同，使植物甾醇单体的化学结构复杂而多样。已从植物中鉴定出了近百种植物甾醇及相关衍生物，其中谷甾醇（β-Sitosterol）、豆甾醇（Stigmasterol）、菜油甾醇（Campesterol）和菜籽甾醇（Brassicasterol）相对含量较多。从化学结构上看，β-谷甾醇比菜油甾醇在支链上多一个CH₂基团，豆甾醇比菜籽甾醇在支链上多一个CH₂基团，菜籽甾醇和豆甾醇在支链上均含有一个双键。植物甾醇化学结构只有细微差别，导致了目前对它们的分离分析和纯化的困难。

植物甾醇具有十分重要的生理功能，β-谷甾醇具有类似氢化可的松和羟基保泰松的功能，有较强的抗炎作用；植物甾醇对治疗溃疡性皮肤鳞癌有明显功能，并且对血栓症有预防作用。植物甾醇除了在药物上的应用外，最为引人注目的是其具有降低胆固醇吸收的功效，并可有效降低血清中低密度脂蛋白（LDL-C）水平。基于植物甾醇对人体的诸多功能及其特有的性质，植物甾醇已在医药、食品、化妆品及饲料等行业中得到了广泛的应用。

目前市场上销售的为甾醇混合物和2-3种Δ5-植物甾醇单体（见Sigma-Aldrich产品目录，包括克数级豆甾醇、毫克级谷甾醇、以及纯度为60%的毫克级菜油甾醇，且价格较贵），其他高纯度Δ5-植物甾醇单体和所有的Δ7-植物甾醇单体均无市售产品。我国对植物甾醇的研究现在大多只停留在对总植物甾醇的提取和分析方面，对其活性成分的具体研究及应用鲜有报道。特别是对植物甾醇单体的研究，国内尚不多见。随着国内外对甾醇研究的日益关注和快速进展，植物甾醇的药用价值越来越受到人们的重视。国外利用高品质的甾醇开发研究出许多高档的药物，对高纯度甾醇单体的需求量大幅上升。这主要是因为：（1）结构的不同使不同甾醇的功能也有一定的差异。例如谷甾醇具有明显的抗炎性，可用于皮肤溃疡和皮肤肿瘤；而豆甾醇具有一定的表面活性作用，可用作制备液晶的乳化助剂、无刺激保湿剂及营养剂和调理剂等，还可根据需要用于各种适宜所需的地方。（2）不同甾醇的功效可能会相互影响。例如，有报道称，菜油甾醇会降低谷甾醇的降胆固醇的作用，因而要求在谷甾醇的产品中菜油甾醇的最大含量要小于40%。（3）合成的需求。目前在以甾醇为前体合成药物时，要求单个甾醇具有较高的纯度以利于控制反应的条件及产品的性质和疗效。国外发达国家十分重视天然甾体（植物甾醇）资源的开发利用，重视食用油工业生产中脱臭馏出物等工业废弃物的综合利用，不仅原料来源稳定，而且价格相对便宜，在产品竞争上具有很大的优势。因此，如何将混合植物甾醇分离成甾醇单体产品，并提高其纯度和收率，是当前植物甾醇分离精制研究的热点。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种从混合植物甾醇中分离制备植物甾醇单体的方法，可以快速同时获得多种不同结构的高纯度植物甾醇单体。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

一种从混合植物甾醇中分离制备甾醇单体的方法，包括以下步骤：

① 将植物甾醇混合物完全溶解于丙酮中，室温冷却至结晶析出，抽滤并干燥；

② 将步骤①所的产物溶解于乙腈中，进样入高效液相色谱柱，以乙腈/异丙醇/水作为流动相，对混合甾醇中的各化合物实现基线分离，对各单峰分别进行回收；多次循环进样，分别回收相同馏分的各单峰物质于相应回收瓶中；

③ 旋转蒸发去除各馏分中的溶剂，得最终产品。

所述步骤①中的植物甾醇混合物与丙酮的质量体积比1：5~1：10克/毫升，用50~60℃丙酮完全溶解甾醇混合物后，室温冷却6~12小时，有针状结晶析出，抽滤并干燥结晶，得白色针状或粉末状甾醇混合物。

所述步骤②中的植物甾醇混合物室温溶解于有机溶剂乙腈中，质量体积比1：0.5~1：2毫克/毫升，视混合甾醇在乙腈中的溶解度而定。每次色谱进样量在1~2 毫升。