[发明专利]一种戊型肝炎病毒IgG抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种戊型肝炎病毒IgG抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，戊型肝炎)是非甲非乙型急性肝炎的病原体，主要经粪口途径传播，也有报道可以通过血液传播。人对戊型肝炎普遍易感，病人发病症状严重，病死率高，青壮年戊肝病死率可达1％～2％，远较其它各型肝炎高，孕妇戊肝病的死亡率可高达20％左右，给人类健康造成严重威胁。

ELISA检测法是目前用于检测血清戊型肝炎抗体最常用的一种方法，其中以间接ELISA用途最广，现在已有商品化的试剂盒。用于检测戊型肝炎的抗原有3种即：组织培养全病毒抗原，合成肽抗原和表达抗原，目前最受关注的是表达抗原。常用的表达抗原有ORF22的表达抗原，ORF23的表达抗原以及同时含有ORF22和ORF23编码产物的重组表达抗原。Uchida等应用结构基因ORF22区中部的一段重组表达蛋白作为抗原的抗戊型肝炎ELISA法检测52例戊肝病人血清，戊型肝炎阳性率为67.31％。Tsarve等构建了含有巴基斯坦戊型肝炎SAR255株完整戊型肝炎ORF22基因组的重组杆状病毒63222IV22，ELISA法监测接种戊型肝炎的8种灵长类动物的血清学转变，证实应用此法检测戊型肝炎具有高度灵敏性和特异性。国内何志强等利用大肠杆菌表达的部分ORF22蛋白，建立的双抗原夹心ELISA方法，该方法与利用同一抗原的间接ELISA比较，结果符合良好，且s/co(OD/cutoff)比值较间接法更高。但ELISA法操作复杂、检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作，大概需要用两个小时以上。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中的戊型肝炎病毒IgG抗体的戊型肝炎病毒IgG抗体胶体金法检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种戊型肝炎病毒IgG抗体胶体金法检测试剂盒，包括硝酸纤维素膜检测线包被的重组抗原HEV-Ag、质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体和金标垫上包被的由胶体金标记的鼠抗人IgG单抗，

所述重组戊型肝炎病毒抗原浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定；

所述羊抗鼠IgG抗体浓度大于4mg/ml；

所述鼠抗人IgG单抗浓度大于2mg/ml，用SDS-PAGE测定，上样量在10μl条件下为两条带。

本发明的另一个目的是提供一种根据所述的戊型肝炎病毒IgG抗体胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)反应膜的制备：用磷酸盐缓冲液将重组HEV-Ag稀释到包被浓度为1.0mg/ml，将羊抗鼠IgG抗体稀释成包被浓度为2.0mg/ml，将两种包被液分别划到硝酸纤维素膜上，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存；

(2)鼠抗人IgG单抗金结合物垫的制备：将标记浓度为10-23μg/ml的鼠抗人IgG单抗与胶体金进行偶联制得胶体金标记鼠抗人IgG单抗溶液，以转速为12000r/min离心40min，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的1/2，然后用混合液浸泡金标垫，制备成HEV-IgG金结合物垫，将HEV-IgG金结合物垫干燥保存；

(3)切割装配：在反应膜所在胶板的上部揭去1.5cm宽的不干胶纸，粘贴上粗纤维滤纸，使纸的下部压住反应膜，揭去反应膜下部的0.9cm的不干胶纸，贴上HEV-IgG金结合物垫，并且金结合物垫的上部压住反应膜1mm，再揭去金结合物垫下部的的不干胶纸，贴上样品垫，样品垫的上部压住金结合物垫的下部1mm，制成反应板，再用切条机切成4mm试纸条，进行装卡后，装入铝箔袋内制成产品。

所述步骤(1)和(2)的干燥条件为37℃干燥3小时。

所述步骤(2)的鼠抗人IgG单抗的标记浓度为10μg/ml。

本发明的有益效果为：戊型肝炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于戊型肝炎病毒IgG的检测和控制效果明显。

具体实施方式

一、生产工艺条件的确定

1、反应膜包被条件的优化：

1.1 检测线包被浓度和胶体金标记鼠抗人IgG稀释比例的选择：