[发明专利]一种JC病毒的检测方法、其试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒的检测方法和试剂盒，具体讲，涉及一种JC病毒的检测方法及其试剂盒。

背景技术

JC病毒(JCV)属人类多瘤病毒，是一种小双链DNA病毒。JCV由PADGETT于1971年等首先在进行性多灶性脑白质病(Progressive Multifocal Lukoenphalapathy，PML)患者中发现并分离出。该病毒只有一种血清型，但可分为30多个基因型。

JCV是一种机会感染性病原，正常人群中血清学阳性率高达80％以上。初次感染一般发生在儿童时期，并且多无症状。JCV可通过分娩(胎盘)、哺乳或长期共同生活接触从母亲传播给子女，也可通过呼吸道、消化道传播。初次感染后，JCV以潜伏状态存在于人体组织，但是当宿主免疫力降低时，病毒可以重新激活复制，并且导致宿主病理改变。

JCV具有明显的嗜神经性特点，严重免疫抑制患者感染JCV后可引起进行性多灶性脑白质病(PML)。PML主要发生于淋巴网状内皮细胞恶性肿瘤如慢性淋巴细胞性白血病、淋巴增生障碍(如淋巴瘤)、实质性器官瘤、重度免疫抑制的患者(包括爱滋病、系统性红斑狼疮、韦格肉芽肿病、硬皮病、皮肌炎、多发性肌炎及类风湿性关节炎等)和器官移植后药物治疗所致严重免疫抑制患者。

JCV还能在肾脏组织中复制，并通过尿液排出病毒。器官移植后，免疫抑制剂的使用是诱导多瘤病毒激活复制的重要原因，其中，40％以上的肾移植患者可检测到JCV的复制。与BK病毒(BKV)一样，JCV的感染也可致肾移植患者的多瘤病毒相关性肾病(PVAN)。PVAN被认为是影响肾移植手术成功与否最关键的因素之一。形态学上，比如Decoy细胞检测与肾组织活检均不能区分BKV与JCV感染。

JCV具有致瘤性。近年国外研究结果发现，JCV在体外可使人及动物多种组织类型正常细胞发生恶性转化，在仓鼠及转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成，但其致瘤机制尚不清楚。

目前没有针对JCV有效的抗病毒药物，早期诊断是JCV感染相关疾病防治的最好手段。确认JCV感染的检测包括检测血清中特异性VP1抗体；对感染者的尿液、脑脊液、血液及病变组织进行JCV DNA检测；对活组织进行原位杂交及免疫组化检测等。由于JCV在人群中感染率很高，抗体检测并非确证活动性JCV感染的可靠方法。国外研究认为，利用聚合酶链式反应(PCR)对尿液、血液或脑脊液特异性地检测JCV DNA是PVAN或PML早期诊断及预测的最佳方法。PCR技术检测方法的灵敏度为75％，特异度则高达96％，同时可以区分BKV与JCV的感染。荧光定量PCR比常规PCR具有更高的灵敏度、特异性，操作更加快速、方便，是用于JCV DNA检测的理想手段。目前国内对JCV的研究尚属空白，更没有成熟的检测方法或试剂。

综上亟需能够实现快速、有效且准确检测JC病毒的产品，以用于JC病毒载量的检测，JC病毒相关性疾病的预测及治疗监测。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种用于检测JC病毒的方法；

本发明的第二发明目的在于提出检测JC病毒的试剂盒；

本发明的第三发明目的在于提出该检测JC病毒试剂盒的应用。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种JC病毒的检测方法，包括以下步骤：

(1)针对JC病毒基因组设计特异性引物JCV-F和JCV-R，Taqman荧光探针JCV-P，Taqman荧光探针JCV-P的5’端标记有荧光基团，在除5’端外的任意一个位置上标记有淬灭基团，优选为3’端；

(2)处理待测样本，进行PCR反应；

(3)通过荧光定量PCR仪检测反应结果；

其中，JCV-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列；

JCV-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，或由SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列；

JCV-P的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，或由SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列经取代、缺失、添加形成的核苷酸序列。

其中，SEQ ID NO：1的核苷酸序列为GGTATACACAGCAAAAGAAGCAACA，

SEQ ID NO：2的核苷酸序列为CAGTGATGATGAAAACACAGGATCC，