[发明专利]一种呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗，其特征在于F2蛋白是由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列所编码或具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.一种权利要求1所述的呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗的制备方法，其特征是包括以下具体步骤：

（1）重组表达载体F2/pFN18K的构建

以F/pMD18T质粒为模板，PCR扩增获得F2基因，并引入NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点和6×His标签，F2基因经NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后得到带有粘性末端的目的基因，并与同样双酶切过的大肠杆菌表达载体pFN18K相连接，形成重组表达载体F2/pFN18K；

（2）F2蛋白的诱导表达及其纯化

重组表达载体F2/pFN18K转化到大肠杆菌表达菌株中，形成重组工程菌，重组工程菌经过发酵培养，采用鼠李糖诱导表达Halo-F2融合蛋白；经诱导的重组工程菌采用超声破菌，4℃下2000rpm离心10分钟后，用梯度透析方法对Halo-F2融合蛋白复性，复性后的蛋白在4℃下，透析至烟草蚀斑病毒蛋白酶反应液中，每1mg Halo-F2融合蛋白加入10U TEV酶，酶切反应8h-12h，酶切后的蛋白经过层析纯化，得到疫苗蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求2所述的呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗制备方法，其特征在于大肠杆菌表达载体为质粒pFN18K及其衍生质粒，以及适用于大肠杆菌系统的含HaloTag^?7或脱卤素酶的遗传修饰衍生物与TEV酶切位点系列的表达载体。

4.根据权利要求2或3所述的呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗制备方法，其特征在于大肠杆菌表达菌株为KRX菌株及其它E. coli K细胞株。

5.根据权利要求4所述的呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗制备方法，其特征在于转化大肠杆菌表达菌株的方法为热休克转化法，电转化法或原生质体转化法。

6.根据权利要求5所述的呼吸道合胞病毒F2蛋白亚单位疫苗制备方法，其特征在于采用金属离子亲和层析纯化法或离子交换层析法纯化蛋白。