[发明专利]抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的人-鼠嵌合抗体及其制法与用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)受体(death receptor 5，DR5)的人-鼠嵌合抗体、高效表达该抗体的真核表达载体、产生该抗体的稳定细胞株、制备所述人-鼠嵌合抗体的方法及所述人-鼠嵌合抗体及其组合物的用途。 

背景技术

死亡受体5(death receptor 5，DR5)是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)的受体，其胞内区含有死亡结构域。DR5与天然配体TRAIL结合后能有效激活细胞凋亡信号转导途径，导致细胞死亡。前期研究证明，鼠源的功能性抗DR5的单克隆抗体能够诱导体外培养的多种肿瘤细胞死亡，体内能有效抑制肿瘤生长，并对正常组织和细胞没有毒性(Guo Y et al.，A novel anti-human DR5 monoclonal antibody with tumoricidal activity induces caspase-dependent and caspase-independent cell death J Biol Chem 2005；280(51)：41940-52)。但是，利用杂交瘤技术制备的该单克隆抗体为鼠源的异种免疫球蛋白，直接用于人类肿瘤的治疗，可能引起人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)反应，削弱其治疗效果并对人体产生有害作用。 

因此，将鼠源抗体进行修饰改造，降低其对人体的免疫原性是将所述抗体成功应用于制药用途的必要途径。常见的鼠源抗体改造途径包括嵌合和人源化。人-鼠嵌合抗体是利用基因工程技术将鼠源性抗体的可变区与人源抗体的恒定区相连接，构建成完整的嵌合抗体，可以在保持原单抗特异性和亲和力的基础上，减少人抗鼠抗体反应，延长其半衰期和改善药代动力学特性。 

哺乳动物细胞表达系统可以高效产生具有正确的折叠、装配、空间构象和良好生物学效应的完整抗体分子，是嵌合抗体最理想的表达体系，而真核表达载体的构建和宿主细胞的选择对嵌合抗体的表达水平非常重要。理想的真核表达载体需要强的启动子和适当的筛选标志，既有利于基因本身的扩增，又可以作为阳性细胞的筛选。 

因此，本发明的技术问题在于利用嵌合抗体技术制备抗DR5人-鼠嵌合抗体。 

发明内容

因此，本发明的技术目的在于提供一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体(DR5)的人-鼠嵌合抗。 

因此，本发明的第一方面涉及一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体，其特征在于所述嵌合抗体的轻链和重链可变区的氨基酸序列包括SEQ ID NO：1所示的轻链可变区(VL)氨基酸序列和SEQ ID NO：2所示的重链可变区(VH)氨基酸序列，所述嵌合抗体的恒定区为人抗体的恒定区。 

优选地，所述嵌合抗体的重链恒定区为人IgG1的恒定区，轻链恒定区为人κ链。 

优选地，所述嵌合抗体的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为： 

CDR1的24位到39位氨基酸：RSSQSLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO：3)； 

CDR2的55位到61位氨基酸：KVSNRFS(SEQ ID NO：4)； 

CDR3的94位到102位氨基酸：FQSTHVPHT(SEQ ID NO：5)；和/或 

所述嵌合抗体的重链可变区CDR11、CDR22和CDR33的氨基酸序列分别为： 

CDR11的31位到35位氨基酸：DFSMN(SEQ ID NO：6)； 

CDR22的55位到66位氨基酸：WINTETGEPTYADDFKG(SEQ ID NO：7)； 

CDR33的99位到101位氨基酸：IDY(SEQ ID NO：8)。 

最优选地，所述嵌合抗体由2011年6月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.4938的稳定细胞株表达，命名为Zaptuximab。