[发明专利]抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR5的人-鼠嵌合抗体及其制法与用途

权利要求书

1.一种抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体，其特征在于所述嵌合抗体的轻链和重链可变区的氨基酸序列包括SEQ ID NO：1所示的轻链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO：2所示的重链可变区氨基酸序列，所述嵌合抗体的恒定区为人抗体的恒定区。

2.根据权利要求1所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体，其特征在于所述嵌合抗体的重链恒定区为人IgG1的恒定区，轻链恒定区为人κ链。

3.根据权利要求1或2所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体，其特征在于所述嵌合抗体的轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为：

CDR1的24位到39位氨基酸：如SEQ ID NO：3所示；

CDR2的55位到61位氨基酸：如SEQ ID NO：4所示；

CDR3的94位到102位氨基酸：如SEQ ID NO：5所示；和/或

所述嵌合抗体的重链可变区CDR11、CDR22和CDR33的氨基酸序列分别为：

CDR11的31位到35位氨基酸：如SEQ ID NO：6所示；

CDR22的55位到66位氨基酸：如SEQ ID NO：7所示；

CDR33的99位到101位氨基酸：如SEQ ID NO：8所示。

4.根据权利要求1到3任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体，其特征在于所述嵌合抗体由2011年6月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.4938的稳定细胞株表达，命名为Zaptuximab。

5.一株稳定表达抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的稳定细胞系，其分类名称为稳定表达抗DR5人-鼠嵌合抗体CHO细胞株，于2011年6月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.4938。

6.一种稳定表达权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的重组真核表达载体，其特征在于所述重组真核表达载体带有CAG强启动子和二氢叶酸还原酶筛选标记，来自鼠抗人DR5的单克隆抗体重链可变区和轻链可变区的编码序列、人IgG1重链恒定区和轻链恒定区κ链的序列以及在重链和轻链之间加入的具有自我剪切功能的Furin/2A序列被有效连接以高效表达所述的人-鼠嵌合抗体，优选地，所述重组真核表达载体的起始质粒为pCDNA3，优选地，所述鼠抗人DR5的单克隆抗体为AD5-10。

7.根据权利要求6所述的稳定表达权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的重组真核表达载体，其特征在于来自鼠抗人DR5的单克隆抗体重链可变区和轻链可变区的编码序列、人IgG1重链恒定区和轻链恒定区κ链的序列以及在重链和轻链之间加入的具有自我剪切功能的Furin/2A序列的连接起来的序列如SEQ ID NO：9所示。

8.一种制备如权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：

A)用如权利要求6或7所述的稳定表达权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的重组真核表达载体转染CHO-dhfr^-细胞；

B)利用氨甲蝶呤加压筛选获得稳定表达嵌合抗体的细胞株。

9.一种如权利要求8所述的方法获得的稳定细胞株。

10.一种组合物，其活性成分为如权利要求1到4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体与化疗药物组成，优选地，所述化疗药物是TRAIL或表柔比星。

11.如权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体、如权利要求6或7所述的稳定表达权利要求1至4任一项所述的抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体胞外区的人-鼠嵌合抗体的重组真核表达载体或根据权利要求10所述的组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途，优选地，所述肿瘤为白血病、肝癌、结肠癌或肺癌。