[发明专利]Roundup Ready转基因大豆检测用引物组及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测试剂，具体涉及一种Roundup Ready转基因大豆检测用引物组及其诊断试剂盒。

背景技术

孟山都公司于1994年研制的抗草甘膦品种大豆，转化了来自于微生物Agrobacterium tumefaciens的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶（CP4 EPSPS）编码基因，能够抵抗除草剂草甘膦对莽草酸合成途径的抑制，使转基因大豆在喷洒除草剂之后能够正常生长。该品种的受体是大豆品种A5403，转基因大豆基因组中整合了外源的 CP4 EPSPS 基因、E35S 启动子和NOS 终止子。该品种是目前种植面积最大的转基因大豆品种，广泛应用在食用油和食品的加工生产当中。

为了加强对转基因产品的监督和管理，目前发展了多种转基因成分检测方法，从基于蛋白质的 ELISA 检测技术到基于核酸的聚合酶链式反应（PCR）技术以及快速发展的基因芯片技术。其中 PCR 检测技术以其灵敏性、特异性、高效性而最为通用，这种技术通过检测转基因产品中含有的外源核酸片段来鉴定，随着荧光实时定量聚合酶链式反应（real time PCR）的出现，不仅能够进行转基因产品的定性鉴定，而且可以对转基因成分进行定量。

以 PCR 技术为代表的转基因产品检测技术在实际应用中也存在一些问题，如普通 PCR 技术需要专门的仪器，而且存在容易交叉污染和操作过程烦琐的缺点。而 Real time PCR 技术虽然较好地解决了交叉污染的问题，并简化了操作过程，但却需要更复杂的定量测定仪器，因此不适用于现场快速检测。而且实时定量聚合酶链式反应PCR技术中荧光探针的成本较高，加大了推广应用的难度。基因芯片技术能够实现快速和高通量的检测，然而价格昂贵，检测成本高。所以及时运用生物技术发展的最新成果对满足转基因产品检测要求的不断提高具有重要意义。其中等温扩增（Isothermal Amplification）核酸快速检测技术是转基因产品检测技术上的长足进步，现已建立起来的环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplication of DNA, 简称LAMP）具有很多的优越性，且目前也未见有用环介导等温扩增技术检测 转基因大豆快速诊断试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种对可用于环介导等温扩增技术检测Roundup Ready转基因大豆EPSPS-NOS基因，且对该EPSPS-NOS基因具有高特异性的检测用引物组。

本发明的另一个目的在于提供一种检测成本低、使用方便、检测速度快、特异性高的基于环介导等温扩增技术的转基因大豆快速诊断试剂盒。

本发明的上述目的是通过如下技术方案予以实现的：

一、本发明的Roundup Ready转基因检测用引物组，是基于环介导等温扩增技术，根据已公开的Roundup Ready转基因大豆EPSPS -NOS基因序列，选取Roundup Ready转基因大豆EPSPS-NOS基因的特异性序列，然后分析设计出的，能专一性鉴别Roundup Ready转基因大豆EPSPS-NOS基因的特异性引物组，通过LAMP法来鉴定Roundup Ready转基因大豆EPSPS-NOS基因，该EPSPS-NOS基因引物组由如下四条引物组成：

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；

内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；