[发明专利]去细胞异种角膜基质载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种去细胞异种角膜基质载体，其特征在于，该载体是经高渗溶液联合酶消化法去除上皮细胞及基质细胞后的动物板层角膜；该载体的制备方法包括以下步骤：

(1)动物眼球的摘取和保存：摘取动物眼球，用生理盐水冲洗眼球，将冲洗后的动物眼球置于湿房中，4℃～8℃保存，24小时内进行板层角膜的剖切；

(2)板层角膜的剖切：用生理盐水和含400U/mL妥布霉素的生理盐水交替冲洗步骤(1)中保存的动物眼球，然后在手术显微镜下无菌操作，用直径5mm～12mm的刻度环钻钻取150μm～400μm厚的板层角膜；

(3)高渗溶液联合酶消化法去除板层角膜上皮细胞及基质细胞：

301、将步骤(2)中所述板层角膜放入高渗溶液中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～3天；所述高渗溶液为质量浓度3％～20％的NaCl水溶液；

302、将301中浸泡后的板层角膜取出后放置于含胰酶的缓冲溶液中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～4天，所述含胰酶的缓冲溶液中胰酶的质量百分含量为0.05％～0.35％；或者将301中浸泡后的板层角膜取出后放置于胰酶替代物中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～4天；所述缓冲溶液为D-Hanks溶液，所述胰酶替代物为TrypLE Express；

303、将302中浸泡后的板层角膜取出后用去离子水洗涤3次，得到去细胞异种角膜基质载体；

(4)干燥处理：将303中所述去细胞异种角膜基质载体置于无菌平皿中，然后一同放入装有干燥剂的干燥器中，密封，室温下干燥脱水1天～3天，所述干燥剂为无水氯化钙；

(5)消毒处理：将步骤(4)中干燥后的去细胞异种角膜基质载体置于无菌瓶中，密封，然后采用Co 60辐射进行消毒处理，辐射照射总剂量为25kGy；

(6)保存：将步骤(5)中经消毒处理后的去细胞异种角膜基质载体在室温条件下常规保存，备用。

2.根据权利要求1所述的去细胞异种角膜基质载体，其特征在于，所述动物为猪、牛或鸵鸟。

3.一种制备如权利要求1或2所述的去细胞异种角膜基质载体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)动物眼球的摘取和保存：摘取动物眼球，用生理盐水冲洗眼球，将冲洗后的动物眼球置于湿房中，4℃～8℃保存，24小时内进行板层角膜的剖切；

(2)板层角膜的剖切：用生理盐水和含400U/mL妥布霉素的生理盐水交替冲洗步骤(1)中保存的动物眼球，然后在手术显微镜下无菌操作，用直径5mm～12mm的刻度环钻钻取150μm～400μm厚的板层角膜；

(3)高渗溶液联合酶消化法去除板层角膜上皮细胞及基质细胞：

301、将步骤(2)中所述板层角膜放入高渗溶液中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～3天；所述高渗溶液为质量浓度3％～20％的NaCl水溶液；

302、将301中浸泡后的板层角膜取出后放置于含胰酶的缓冲溶液中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～4天，所述含胰酶的缓冲溶液中胰酶的质量百分含量为0.05％～0.35％；或者将301中浸泡后的板层角膜取出后放置于胰酶替代物中，在温度为25℃～40℃条件下浸泡1天～4天；所述缓冲溶液为D-Hanks溶液，所述胰酶替代物为TrypLE Express；

303、将302中浸泡后的板层角膜取出后用去离子水洗涤3次，得到去细胞异种角膜基质载体；

(4)干燥处理：将303中所述去细胞异种角膜基质载体置于无菌平皿中，然后一同放入装有干燥剂的干燥器中，密封，室温下干燥脱水1天～3天，所述干燥剂为无水氯化钙；

(5)消毒处理：将步骤(4)中干燥后的去细胞异种角膜基质载体置于无菌瓶中，密封，然后采用Co 60辐射进行消毒处理，辐射照射总剂量为25kGy；

(6)保存：将步骤(5)中经消毒处理后的去细胞异种角膜基质载体在室温条件下常规保存，备用。

4.根据权利要求3所述的去细胞异种角膜基质载体的制备方法，其特征在于，步骤301中所述NaCl水溶液的质量浓度为8％～12％。

5.一种如权利要求1或2所述的去细胞异种角膜基质载体作为角膜移植供体在角膜移植中的应用。