[发明专利]一种溶菌酶分子印迹-量子点纳米荧光探针的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及量子点荧光探针的制备技术，特别是一种溶菌酶分子印迹-量子点纳米荧光探针的制备方法。

背景技术

量子点(quantum dots，QD)是一种由II-VI族或III-V族元素组成的、能够接受激发光产生荧光的半导体纳米晶粒。量子点具有激发光谱宽且连续、发射光谱窄且对称、发射波长可调、荧光量子产率高、光化学稳定性好等优越的荧光特性。近年来，量子点(半导体纳米粒子)在生物、医学领域的应用，极大的拓展了量子点研究的深度和广度，成为生物、医学领域最有生命力的发展方向之一。而且，量子点作为荧光探针在生物、医学方面的研究中发挥巨大作用(M.Bruchez Jr.，M.Moronne，P.Gin，S.Weiss，A.P.Alivisatos，Science，1998，281(5385)：2013-2016；W.C.W.Chan，S.Nie，Science，1998，281(5385)：2016-2018)。由于理想的荧光探针必须能够与相应的目标分析物发生特异性的结合。因此发展对目标分析物具有特异性识别能力的荧光探针是主要研究内容之一。选择合适的天然抗体对量子点进行标记，可以实现对目标物的分析。但由于天然抗体价格昂贵、提取过程繁琐，而且稳定差，因此发展人工抗体技术(分子印迹技术)是解决这一问题的途径之一。

分子印迹(又称分子模板或分子烙印)技术是指制备对目标分子具有特异性识别能力的聚合物的技术(G.Valtakis，L.I.Andersson，R.Muller，K.Mosbach，Nature，1993，361(6413)：645-647；G.Wulff，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1995，34(17)：1812-1832)。由于印迹聚合物中空腔的空间结构以及空穴中功能基团的种类、数量和位点均与目标分子高度互补，因而它对目标分子的立体结构具有记忆功能。

基于分子印迹技术的量子点荧光探针的制备技术，则将分子印迹技术应用于量子点荧光探针的制备，目前，已被成功地应用于小分子的识别分析(C.I.Lin，A.K.Joseph，C.K.Chang，Y.D.Lee，J.Chromatogr.A，2004，1027(1-2)：259-262；C.I.Lin，A.K.Joseph，C.K.Chang，Y.D.Lee，Biosens.Bioelectron.，2004，20(1)：127-131；H.-F Wang，Y.He，T.-R Ji，X.-P.Yan，Anal.Chem.，2009，81(4)：1615-1621)。将量子点和蛋白质分子印迹联合，结合分子印迹技术的高选择性与量子点荧光检测技术的高灵敏性，制备蛋白质分子印迹-量子点荧光探针可以应用于目标蛋白的选择性识别及测定。

发明内容

本发明的目的在于针对上述技术分析，提供一种溶菌酶分子印迹-量子点纳米荧光探针的制备方法，该量子点纳米荧光探针，对模板分子的识别具有有较高的选择性和灵敏性；且合成方法过程简单，不同批次间重现性较好，在实际样品中溶菌酶的选择性识别和检测中有着良好的应用前景。

本发明的技术方案：

一种溶菌酶分子印迹-量子点纳米荧光探针的制备方法，是以碲化镉量子点为载体，溶菌酶(N-乙酰胞壁质聚糖水解酶)为模板分子，结合分子印迹技术的选择性和量子点的荧光特性合成的纳米荧光探针，包括如下步骤：

1)将碲粉(Te)、NaBH₄与蒸馏水混合，在氮气保护并搅拌的条件下进行还原反应制得NaHTe溶液，将制得的NaHTe溶液快速加入到巯基丙酸(MPA)的CdCl₂溶液中，用NaOH水溶液调节溶液的pH为9.0，然后沸水浴加热所述溶液2h，即可制得碲化镉量子点溶液；

2)将牛血清白蛋白溶于蒸馏水中，加入硼氢化钠，搅拌一个小时，然后在70℃水浴中加热30分钟，得到变性的牛血清白蛋白(dBSA)溶液，将变性的牛血清蛋白溶液加入到碲化镉量子点溶液中，磁力搅拌24小时，得到dBSA包覆的量子点溶液；

3)在dBSA包覆的量子点溶液中依次加入模板分子溶菌酶、功能单体3-氨丙基三乙氧基丙烷、交联剂正硅酸乙酯和氨水，室温下磁力搅拌12小时，通过溶胶凝胶水解聚合反应在量子点形成分子印迹层，即为探针；

4)用十二烷基硫酸钠水溶液与探针混合，振荡20-60分钟，离心去除上清液，重新用上述十二烷基硫酸钠溶液洗涤，重复此过程，直到用紫外分光光度计检测模板分子洗净为止，即可制得溶菌酶分子印迹-量子点纳米荧光探针。