[发明专利]一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法有效
| 申请号： | 201110203309.7 | 申请日： | 2011-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN102242225A | 公开（公告）日： | 2011-11-16 |
| 发明（设计）人： | 陈发棣;尤燕平;陈素梅;蒋甲福;房伟民;管志勇 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 菊花 cvb cchmvd 病毒 二重 rt pcr 检测 方法 | ||
1.一种菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）从菊花植株取样并提取总RNA；
（2）分别针对CVB和CChMVd病毒设计两对特异性引物：CVB-F，CVB-R；CChMVd-F，CChMVd-R；
（3）以随机六聚体为引物进行反转录得到两种cDNA；
（4）利用RT-PCR技术扩增所述cDNA，将扩增的产物进行琼脂糖凝胶电泳，得到665bp特异性片段表示感染CVB，得到206bp特异性片段表示感染CChMVd。
2.根据权利要求1所述的菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤（2）所述两对特异性引物分别为：
CVB-F：5’-ACCGAATTCTTAGTCACAATGCCTCCC-3’，
CVB-R：5’-TCCGAGCTCATAGAGACGGCATACCTT-3’；
CChMVd-F：5’-CAGTTTCGGCTTGTGCGGGAGT-3’，
CChMVd-R：5’-TCCGAGGAGAATATCCAACGAG-3’。
3.根据权利要求1所述的菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤（4）所述RT-PCR反应体系25μl中包括0.5μl CVB-F，0.5μl CVB-R，0.5μl CChMVd-F，0.5μl CChMVd-R。
4.根据权利要求1所述的菊花CVB和CChMVd病毒的二重RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤（4）所述RT-PCR反应设定为94℃预变性5 min，94℃变性43~47s，52℃退火40~45s，72℃延伸1min循环30~35次，72℃延伸10min。
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