[发明专利]一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，特别是涉及一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法。

背景技术

近些年来，对全身性感染的病理、生理过程有了更多了解，支持强化治疗也获得显著改善，但在非心脏重症监护病房中患者的首位死因仍然是全身性感染及其并发症，美国每年大约有500000例全身性感染患者，约40％最终死亡。因此，需要一种标记物能更有效地反映感染导致的炎症损伤程度。降钙素原(procalcitonin，缩略词为PCT)是具有高灵敏度、特异性的新指标，它在细菌或真菌感染合并严重全身系统反应或器官低灌注时显著升高，而在病毒或局灶感染时水平正常或轻度升高，这个特性使得PCT用来鉴别系统感染和非感染性炎症或局灶感染。 

PCT是人类降钙素的前体物，来自定位于第11号染色体上(11p15，4)的单拷贝基因，该基因由2800个碱基对组成，含6个外显子和5个内含子，基因全长M_r约7600，转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译而成，PCT由116个氨基酸残基组成，相对分子量为13KD，包括N端84个氨基酸、具有激素活性的降钙素(CT，32肽)和降钙蛋白(katacalcin，21肽)三部分，PCT作为一种糖蛋白但无激素活性，在正常情况下，具有激素活性的降钙素是在甲状腺滤泡旁细胞产生与分泌，并由细胞内特殊蛋白酶分解PCT成降钙素。

正常健康人体内PCT水平很低(<0.05ng/mL)，血清PCT浓度≤0.5ng/mL出现重症败血症和／或败血症休克的风险较低；血清PCT浓度≥2ng/mL出现重症败血症和／或败血症休克的风险较高。在细菌感染(特别是脓毒血症、革兰阴性杆菌)引起的全身炎症反应时血清PCT水平常显著增高，其增高程度与感染严重程度和死亡率呈正相关，在全身细菌感染患者血清PCT浓度升高比C-反应蛋白（CRP）及其它炎性因子出现早，在感染2h出现升高，6h急剧上升，8～24h维持高水平，且对全身与局部细菌性感染的鉴别具有特殊价值，在非细菌感染时血清PCT浓度不升高。PCT在血中半衰期为22～29h，检测不受临床用药影响，在全身严重细菌感染、败血症及多种器官功能失调综合征的辅助诊断方面， PCT是一个具高灵敏度、高特异性的新指标，不仅能早期鉴别细菌与非细菌感染，更是败血症的预警和诊断指标，且PCT与细菌感染的程度成正相关，因此越来越受到临床重视。

PCT作为一种新的、具有创新意义的严重细菌性感染等疾病的实验指标，提高了临床诊断的准确性，为重症监护、放化疗、服用免疫抑制剂或器官移植等患者合并发热时提供了极其重要的诊断、进一步的检查和治疗的临床依据：PCT可广泛应用于ICU病房、血液科、肿瘤科、儿科、早产儿及新生儿监护室、外科、内科、器官移植科、急诊科、介入诊断和治疗实验室等。

目前用于检测PCT的方法主要有放射性免疫分析法（RIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA），胶体金免疫层析法（GICA）和化学发光免疫分析法（CLIA）。RIA有很高的检测灵敏度，但由于标记物具有放射性危害，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点，已逐渐退出临床检验领域；ELISA法采用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，缩略词为HRP)或碱性磷酸酶标记抗体，并催化底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但ELISA法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目；GICA具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量的缺点。