[发明专利]一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法

权利要求书

1.一种检测降钙素原的试剂盒，其特征在于：包括发光底物、磁微粒偶联抗体、生物素化抗体和酶标记物，所述酶标记物是辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，所述抗体为降钙素原单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述生物素化抗体为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与降钙素原单克隆抗体的偶联产物。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒大小为200nm～5μm，磁微粒表面的活性基团为-COOH或-NH₂。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒表面的活性基团为-COOH。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒偶联抗体中用于偶联的磁微粒的浓度为1~10mg/mL，用于偶联的抗体的浓度为1～5mg/mL。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒偶联抗体的保存液为PBS缓冲液和牛血清白蛋白的混合液。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述发光底物包括A液和B液，所述A液主要是鲁米诺与增强剂，或异鲁米诺与增强剂，所述B液主要为氧化剂。

8.如权利要求1-7任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括用于稀释所述生物素化抗体和酶标记物的稀释液；或所述生物素化抗体和酶标记物溶解在所述稀释液中混合成工作液，所述工作液中，所述酶标记物与所述工作液的体积比为1：2500～1：5000，所述生物素化抗体与所述工作液的体积比为1：1500～1：3500。

9.如权利要求1-7任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括降钙素原标准品和洗涤液中的至少一种。

10.一种使用权利要求1-9任意一项所述的试剂盒进行降钙素原检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 分别将所述酶标记物和生物素化抗体稀释后混合得到工作液，所述工作液中，所述酶标记物与所述工作液的体积比为1：2500～1：5000，所述生物素化抗体与所述工作液的体积比为1：1500～1：3500；

(2) 分别将所述工作液、磁微粒偶联抗体溶液和发光底物在室温下平衡至少30min； 

(3) 在反应容器中加入50μL待测血清和100μL所述工作液，混匀后37℃反应20min后继续以下步骤，或者混匀后直接进行以下步骤：

(4)在步骤(3)的混合溶液中加入50μL的所述磁微粒偶联抗体溶液，混匀，于37℃反应10~30min，形成磁微粒偶联抗体-降钙素原-生物素化抗体-酶标记物复合物，磁性分离，弃去上层未反应的液体，得到下层的所述复合物，洗涤所述复合物后混匀，置于磁性分离器中，分离3min，弃去洗涤液上清液，重复洗涤直到未反应的液体去除干净，以去除未结合的反应物；

(5)将所述发光底物中的A液和B液等体积混合后加入步骤(4)中的所述复合物中，混匀放入化学发光检测仪，检测发光强度值;

(6)根据所述发光强度值与降钙素原的浓度的比例关系计算得到所述待测血清中的降钙素原浓度值。