[发明专利]抗胸腺素α原多克隆抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.抗胸腺素α原多克隆抗体，其特征在于为采用GST-ProTα融合表达制备的融合蛋白免疫新西兰大白兔子后获得的多克隆抗GST-ProTα抗血清。

2.如权利要求1所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备融合蛋白GST-ProTα：

2)制备抗体。

3.如权利要求2所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述制备融合蛋白GST-ProTα采用以下方法：

(1)根据ProTα的基因序列，设计上游引物P1和下游引物P2，将上游引物P1引入BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点；

(2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与pMD18-T Vector连接，重组载体命名为TP，转化DH5α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序；

(3)用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物，将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，用LB培养基培养，加入IPTG，诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳，获得GST-Proα融合蛋白；

(4)将经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proα；

(5)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Proα融合蛋白。

4.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)的(1)中，所述上游引物P1和下游引物P2分别为：

上游引物P1：5’-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’，

下游引物P2：5’-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’。

5.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤1)的(3)中，所述用LB培养基培养的温度为37℃，所述诱导表达的温度为37℃。

6.如权利要求3所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述制备抗体的具体步骤为：

(1)融合蛋白与福氏完全佐剂混合后，分3次脊柱两旁皮下注射，后5次用不完全福氏佐剂同样位置注射；

(2)最后一次注射结束后测效价，当效价达到50000以上时，取血分离血清，得抗胸腺素α原多克隆抗体，分装后保存。

7.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的(1)中，所述分3次脊柱两旁皮下注射，每次间隔为7天；所述后5次用不完全福氏佐剂同样位置注射，每次间隔为7天。

8.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的(2)中，所述最后一次注射结束后测效价是在最后一次注射结束后7天测效价。

9.如权利要求6所述抗胸腺素α原多克隆抗体的制备方法，其特征在于在步骤2)的(2)中，所述分装后保存是保存在-20℃冰箱。

10.如权利要求1所述抗胸腺素α原多克隆抗体在膀胱癌病诊断中的应用。