[发明专利]以Nur77-LKB1相互作用为靶点的抗糖尿病药物筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗糖尿病药物的筛选，尤其是涉及一种建立以Nur77-LKB1蛋白相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物的方法。

背景技术

近年来，全球糖尿病(Diabetes)发病率增长迅速，糖尿病已成为继癌症、心血管疾病之后第三大严重威胁人类健康的慢性病。目前，全世界已有近1.8亿糖尿病患者。据世界卫生组织预计，到2025年，全球成人糖尿病患者人数将增至3亿，而中国糖尿病患者人数将达4000万，在未来的50年内糖尿病仍将是中国一个相当严重的问题。糖尿病可引起多种严重的慢性并发症，如糖尿病肾病、视网膜病变、糖尿病足、心肌梗塞等。这些并发症是造成糖尿病人死亡的主要原因。因此，治疗糖尿病的目标是通过各种方法控制血糖，延缓并发症的发生。

糖尿病是由于体内胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗引发的代谢紊乱综合症，临床上以高血糖和糖尿为主要特征。糖尿病可分为I型糖尿病和II型糖尿病，其中II型糖尿病患者所占比例约为95％。目前，治疗II型糖尿病的药物主要有磺酰脲类、双胍类、α一葡萄糖苷酶抑制剂以及噻唑烷二酮类等，这些抗糖尿病药物在临床上虽然具有一定的疗效，但是仍存在着疗效短、不能特异针对病因以及药物毒副作用等问题，因此，研发新型的抗糖尿病药物在临床上不仅十分迫切而且具有重要性。

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)广泛存在于各种真核细胞中，在调节肌体能量代谢的平衡方面起总开关作用。在肌肉和肝脏中，AMPK的活化增强了葡萄糖的摄取、脂肪酸氧化作用和胰岛素敏感性，并且减少了葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的产生(Hardie DG，et al.，J.Physiol.，2006，574，7-15；Viollet B，et al.，J.Physiol.，2006，574，41-53；Hardie DG，et al.，Physiology.，2006，21，48-60)。因此，AMPK被认为是治疗肥胖和糖尿病的一个非常重要的药理学靶点(Viollet B，et al.，J.Physiol.，2006，574，41-53)。

LKB1(又被称作STK11(serine theonineproteinkinase 11))是AMPK在肝脏中的主要上游激酶。LKB1可以直接磷酸化AMPKα的苏氨酸172位而激活AMPK(Lizcano JM et al.，EMBOJ，2004，23，833-843)。肝脏特异性敲除LKB1的小鼠表现为高血糖症状，其肝脏的AMPKα磷酸化活性很低(Shaw RJ，et al.，Science，2005，310，1642-1646)。因此，LKB1对AMPK的活性起着极为重要的调控作用。

核孤儿受体(nuclear orphan receptor)Nur77(也称TR3、NGFI-B或NAK1)在细胞增殖、分化、凋亡、发育、能量代谢等过程中发挥重要的调控作用。研究表明，Nur77可以通过不同的途径调控葡萄糖代谢，例如，在肝脏中，Nur77可以通过转录调控刺激糖异生途径(Pei，L.，et al.，Nat.Med.2006.12，1048-1055)；而在骨骼肌中，Nur77可以促进细胞对葡萄糖的摄取，并增强其胰岛素敏感性(Fu，Y.，et al.，J.Biol.Chem.2007.282，31525-31533)。因此，Nur77被认为是治疗糖尿病的潜在靶点。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种蛋白-蛋白相互作用靶点。

本发明的第二目的在于提供一种Nur77-LKB1相互作用的检测方法。

本发明的第三目的在于提供一种Nur77-LKB1相互作用靶点的用途。

本发明的第四目的在于提供一种以Nur77-LKB1相互作用为靶点的筛选抗糖尿病药物(化合物)的方法。

所述蛋白-蛋白相互作用靶点为孤儿受体Nur77与腺苷酸活化蛋白激酶AMPK的上游激酶LKB1间的相互作用，即Nur77-LKB1相互作用。

所述Nur77-LKB1相互作用的检测方法选自但不限于：

(1)细胞分子生物学检测方法；或

(2)化学生物学检测方法。

所述细胞分子生物学检测方法可选自免疫共沉淀方法、GST-pull down方法等中的一种。

所述化学生物学检测方法可选自荧光滴定法、BIAcore方法等中的一种。

所述一种Nur77-LKB1相互作用靶点的用途，即以Nur77-LKB1相互作用为靶点在筛选抗糖尿病药物的应用。