[发明专利]植物茎尖转化方法及其专用工具无效
申请号: | 201110197273.6 | 申请日: | 2011-07-14 |
公开(公告)号: | CN102321662A | 公开(公告)日: | 2012-01-18 |
发明(设计)人: | 李银心;吕素莲 | 申请(专利权)人: | 中国科学院植物研究所 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100093 北京市海淀区香*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 植物 转化 方法 及其 专用工具 | ||
1.一种培育转基因植物的方法,包括如下步骤:
1)刺伤目的植物的茎尖生长点,得到处理后目的植物;
2)用含有目的DNA的重组农杆菌菌液侵染步骤1)得到的所述处理后目的植物,得到浸染后幼苗;
3)培养步骤2)得到的浸染后幼苗,得到含有所述目的DNA的转基因植物。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:
步骤1)中,所述刺伤采用如下权利要求6-8中任一所述的金属刷;
步骤2)中,所述含有目的DNA的重组农杆菌菌液按照如下方法制备:
A)将所述目的DNA通过重组载体导入根癌农杆菌得到重组农杆菌;
B)将步骤A得到的所述重组农杆菌重悬于如下权利要求9或10所述培养基,得到的菌液即为含有目的DNA的重组农杆菌菌液。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:
步骤2)中,所述侵染在大气压力为0.05MPa下进行;所述侵染的时间为15-20min,所述侵染的时间具体为15min。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:
步骤1)中,所述目的植物为所述目的植物的种子萌发1-7天得到的植物。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:
步骤1)中,所述目的植物为所述目的植物的种子萌发1、2、3或7天得到的植物。
6.一种用于刺伤所述目的植物茎尖生长点的金属刷,包括金属纤维束和套设在所述金属纤维束外侧的套筒,所述金属纤维束的一端设于所述套筒外,所述金属纤维束的另一端位于套筒内。
7.根据权利要求6所述的金属刷,其特征在于:
所述金属纤维束的直径为0.3-0.8厘米,所述金属纤维束的直径具体为0.5厘米;
所述金属纤维束具体由若干条直径为20-25微米的金属纤维组成;所述金属纤维束尤其具体由若干条直径为20微米或25微米的金属纤维组成;
所述设于所述套筒外的金属纤维束的长度为0.2-0.5厘米,所述设于所述套筒外的金属纤维束的长度具体为0.5厘米。
8.根据权利要求6或7所述的金属刷,其特征在于:
所述金属纤维束和所述套筒固定连接。
9.一种用于配制所述重组农杆菌菌液的培养基,按照如下方法制备:将乙酰丁香酮、SilweetL-77和1/2MS液体培养基混合,得到培养基,所述乙酰丁香酮在所述培养基中的浓度为150μM-250μM;所述SilweetL-77在所述培养基中的浓度为0.005%-0.015%(体积百分比)。
10.根据权利要求9所述的培养基,其特征在于:所述乙酰丁香酮在所述培养基中的浓度为200μM;所述SilweetL-77在所述培养基中的浓度为0.01%(体积百分比)。
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