[发明专利]一种肥厚型心肌病基因分型方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述方法包括：

a、对样本DNA中基因MYH7、MYBPC3和TNNT2进行基因突变的检测，所述基因突变的检测包括MYH7、MYBPC3和TNNT2的基因外显子的PCR扩增及DNA测序，

b、将步骤b中扩增测序后得到的序列与数据库中的标准序列进行比对，从而确定基因分型结果。

2.按权利要求1所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述PCR扩增及DNA测序包括PCR序列扩增、PCR产物纯化和双脱氧链终止法DNA测序。

3.按权利要求2所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述PCR序列扩增的反应体系为1μL的10×PCR Buffer、1μL的2μM引物、1μL的2mM dNTP mix、1μL15mM的MgCl₂、1U的Taq酶、1μL 20ng/μL的DNA模板，然后加双蒸水至10μL，

反应条件为：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，65℃退火30秒，72℃延伸2分钟，共35个循环；72℃延伸5分钟。

4.按权利要求2所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述双脱氧链终止法DNA测序的反应体系为0.25uL的2.5×BigDye、0.875uL5×BigDye Seq Buffer、1uL5pmoL/μL的引物、1.875uL灭菌去离子水、1uL纯化的PCR产物；

反应条件：94℃预变性2分钟；94℃变性10秒，55℃退火10秒，60℃延伸3分钟，25个循环。

5.按权利要求2所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述PCR产物纯化采用EDTA-乙醇法。

6.按权利要求1-5任一项所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述双脱氧链终止法DNA测序所用的通用测序引物序列如SEQ ID NO：1-2所示。

7.按权利要求1所述的肥厚型心肌病基因分型方法，其特征在于，所述MYH7基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：3-28所示；

所述MYBPC 3基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：29-50所示；

所述TNNT2基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：51-58所示。

8.一种肥厚型心肌病基因PCR检测试剂盒，其特征在于，包括MYH7、MYBPC3和TNNT2的基因外显子的PCR扩增引物，

所述MYH7基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：3-28所示；

所述MYBPC3基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：29-50所示；

所述TNNT2基因外显子的PCR扩增引物碱基序列如：SEQ ID NO：51-58所示。

9.按权利要求8所述的肥厚型心肌病基因PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括所述MYH7、MYBPC3和TNNT2各基因外显子PCR扩增产物的DNA测序的通用测序引物，所述通用测序引物序列如SEQ ID NO：1-2所示。