[发明专利]与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位

说明书

技术领域

本发明属于家畜基因工程领域，具体涉及与猪抗病毒免疫相关基因结构基序。

背景技术

猪是全球最为重要的畜禽产品之一。猪瘟是猪的一种有重大经济意义的烈性传染病，全世界每年因为猪瘟造成的经济损失巨大。因此研究猪的抗猪瘟病毒免疫具有重大意义。猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus)是猪瘟的病原，潜伏期24-72小时，其病毒粒子呈圆形，属于黄病毒科瘟病毒属，大小为38～44nm，核衣壳是立体对称二十面体，氯化铯中浮密度1.15～1.17g/ml，有包膜，在细胞质内复制。猪瘟病毒危害猪和野猪，俗称“烂肠瘟”，是一种急性、热性、高度接触性传染病，主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。猪瘟对猪危害极为严重，会造成养猪业重大损失。自1933年在美国俄亥俄州发现猪瘟病以来，猪瘟一直是威胁世界养猪业最严重的疾病之一，每年给各国造成高达几十亿美元的损失，我国每年的养猪量约为10亿头，猪的死亡率超过10％，死亡的第一大原因就是猪瘟，直接经济损失高达40亿元。

目前对猪瘟的防治方法：是保持猪舍干燥、清洁，夏季注意通风，猪舍、用具经常消毒。注意气候变化，加强饲养管理。早发现，早隔离，早治疗。最近几年，人们开始研究抗猪瘟病毒基因，并采用克隆方法表达，发表了一些文献，例如：

1、【题名】世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”诞生【作者】王浩然【刊名】中国兽医学报.2008(9).【文摘】2008年9月9日，世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在位于中国长春的吉林大学农学部诞生。这标志着人类首次培育的“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”获得了成功。9月9日17:40至19:10，在吉林大学原种猪场，3头“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”先后顺利诞生，体质量分别为1 050、1 100和550g。猪瘟是一种严重威胁养猪业的传染病。为了培育出能够抗猪瘟病毒的猪，以吉林大学农学部畜牧兽医学院赖良学教授为首席专家和军事医学科学院军事兽医研究所的专家共同组成的课题组，在国家自然科学基金资助的基础上，经过近2年时间的协作攻关，将能抑制猪瘟病毒的基因转染到“中国实验小型猪”胎儿成纤维细胞内，并以此体细胞进行核移植制备猪克隆胚胎，将此胚胎移植到杜洛克代孕母猪体内，怀孕114d后顺利产出3头健康的克隆仔猪。经对仔猪体细胞进行基因检测，证实该克隆猪的细胞带有所转入的抗猪瘟病毒基因。进一步的抗病毒检测实验正在进行中。世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”诞生。

2、【题名】猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定【作者】周斌刘珂陈溥言【机构】南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，【刊名】病毒学报.2008，24(6)：451-455【文摘】根据猪瘟病毒衣壳蛋白(C)基因序列设计一对引物，RT-PCR扩增获得编码猪瘟病毒衣壳蛋白的C基因，将其插入到含有葡萄球菌核酸酶(SN)基因的真核表达载体pCDNA-SN中，筛选获得重组质粒pCDNA-C-SN。脂质体转染猪肾细胞(PK-15)，并经G418稳定筛选，通过RT-PCR、免疫印迹和间接免疫荧光鉴定表达的融合蛋白，体外DNA消化试验检测核酸酶活性。结果表明融合蛋白C-SN在PK-15细胞中获得了稳定表达，能够被兔抗猪瘟病毒衣壳蛋白多抗所识别，并具有良好的核酸酶活性，能够对DNA进行切割。同时，稳定表达融合蛋白C-SN的PK-15细胞系能够有效抑制猪瘟野毒的增殖，使其感染性降低10²～10³倍。这些结果为进一步将衣壳蛋白靶向病毒灭活策略应用于抵抗猪瘟病毒感染奠定了基础。

尽管目前使用的猪瘟疫苗对猪有很好的保护作用，但猪瘟却始终无法得到彻底的根除，而且猪瘟病毒的感染在临床上也出现了新的特点，除了一般看到的急性临床症状外，还有一些不表现明显临床症状的温和型猪瘟或亚临床型猪瘟，但抗体检测和基因检测都呈阳性，也就是所谓的持续性感染状态，长期携带病毒而不表现临床症状的猪就成为重要的传染源。

发明内容：

本发明的目的是提供一种与猪抗病毒免疫相关基因结构基序，以通过该结构基序，找出能够用于研究猪瘟病毒感染机制，并通过揭示该蛋白基因抗猪瘟病毒的机制，开发一种治疗猪瘟的药物。