[发明专利]与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位

权利要求书

1.一种与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位，其特征在于：包括以下的步骤：

(1)基因在染色体上的定位；(2)基因片段的获得；(3)载体构建；(4)基因在细胞上的定位；(5)TPR结构基序的获得；

所述的基因在染色体上的定位，首先是采用猪全基因组芯片分析猪外周血淋巴细胞的基因表达谱，发现ISG60基因在猪瘟病毒感染后表达量增多，在感染后6天该基因的表达量最多，通过将ISG60基因的EST序列与NCBI数据库中公布的猪基因组序列进行比对，发现ISG60基因定位于猪14号染色体上；

所述的基因片段的获得，首先是采用重组人I型干扰素IFN-α2b刺激猪肾上皮细胞PK-15细胞系介导产生ISG60基因，Trizol抽提诱导后的PK-15的总RNA，用寡聚核苷酸oligo dT16作为反转录的引物将总RNA反转录为cDNA；根据猪全基因组芯片上的ISG605’端的表达序列标签(EST)序列，设计针对ISG60基因的特异性引物，用特异性引物PCR扩增ISG60基因，并克隆至pMD18-T载体上，测序鉴定，确定获得了ISG60的基因片段；

所述载体构建是将编码6×His的核苷酸标记的ISG60基因，亚克隆至pCDNA3.0真核载体上，将构建好的真核表达载体转染PK-15细胞；

所述基因在细胞上的定位，首先是用重组真核表达载体转染PK-15细胞，然后采用间接免疫荧光技术观察ISG60基因在PK-15细胞上的定位；

所述TPR结构基序的获得是将克隆的猪ISG60基因测序鉴定后，得到包括完整ORF的核苷酸序列，并推导出了相应的氨基酸序列，按已知TPR基序预测方法，对ISG60基因的推导氨基酸序列进行TPR基序预测，预测发现，ISG60基因含7个TPR结构基序。

2.与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位，其特征在于：ISG60基因测序得到的核苷酸序列如下：

(1)猪测序得到的核苷酸序列

①序列特征：

长度：1530碱基对

类型：DNA

链型：双链

几何结构：线性

②分子类型：核苷酸

③序列描述：

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(2)猪ISG60基因推导氨基酸序列：

①序列特征：

长度：509个氨基酸

类型：多肽

链型：单链

几何结构：立体

②分子类型：蛋白质

(3)序列描述：

Met Ser Glu VaAsn Lys Asn Ser Leu Glu Lys Ile Leu Pro Gln Leu Lys Cys His Phe Thr Trp Asn Leu Pro Lys Glu Glu His Val Trp His Asp Leu Glu Asp Arg Val Cys Asn Gln Thr Glu Leu Leu Asn Ser Glu Phe Lys Ala Thr Met Tyr Asn Leu Leu Ala Tyr Ile Lys His Leu Asn Gly Gln Asn Glu Ala Ala Leu Glu Tyr Leu Gln Gln Ala Glu Glu Phe Ile Gln Gln Glu His Thr Asp Gln Ala Glu Ile Arg Ser Leu Val Thr Trp Gly Asn Tyr Ala Trp Val Tyr Tyr His Leu Gly Arg Leu Ser Glu Ala Gln Ile Tyr Val Asp Lys Val Lys Gln Val Cys Glu Lys Phe Ser Asn Pro Tyr Ser Ile Glu Cys Pro Glu Leu Asp Cys Glu Glu Gly Trp Thr Leu Leu Lys Cys Gly Gly Lys Gln Ile Glu Lys Ala Lys Val Tyr Phe Glu Lys Ala Leu Glu Glu Lys Pro Asp Asn Pro Glu Phe Ser Ser Gly Leu Ala Ile Ala Met Tyr Phe Leu Asn Gly Lys Pro Ala Gln Gln Ser Ser Val Asp Ile Leu Lys Glu Ala Ile Glu Leu Ser Pro Asp Asn Gln Tyr Ile Lys Val Leu Leu Ala Leu Thr Leu Gln Lys Met Asn Glu Glu Ala Glu Gly Glu Glu Leu Val Val Glu Ala Leu Glu Lys Ala Pro Arg Gln Thr Asp Val Leu Arg Ser Ala Ala Lys Phe Tyr Arg Val Lys Gly Asp Leu Asp Lys Ala Ile Glu Leu Phe Leu Thr Ala Leu Glu Ser Thr Pro Asn Asn Gly Tyr Leu Tyr His Gln Ile Ala Cys Cys Tyr Arg Ala Lys Val Lys Gln Leu Leu Asp Ala Gly Glu Ser Glu Ala Ser Arg Asn Arg Glu Ile Ile Glu Glu Leu Arg Lys Tyr Ala Lys Asp Tyr Val Asn Lys Ala Ile Glu Lys Gly Leu Asn Pro Leu Tyr Ala Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Leu Leu Glu Ile Gly Glu Cys His Gln Thr Ala Phe Ser Lys Glu Leu Pro Ser Thr Glu Ala Gln Gln Leu His Gln Arg Ser Cys Asn Ser Gln Glu Tyr His Glu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ala Gln Gln Ser Leu Glu Asn Leu Ser Ile Asn Thr Lys Ser Thr Glu Lys Glu Lys Met Lys Tyr Gln Leu Gln Asn Gly Ala Ala Asn Gln Leu Pro Gln Ser Ala Pro Asn Ser Trp Tyr Leu Arg Gly Leu Ile His Lys Met Asn Gly Asp Leu Leu Gln Ala Ala Ala Cys Tyr Glu Lys Glu Leu Gly Tyr Leu Leu Arg Asn Ser Pro Ser Gly Ile Gly Ser Ile Phe Gln Pro Ala Ser Glu Leu Glu Glu Gly Thr Glu Glu Met Asp Gln Gly Ala Asp Gly Ser Thr Leu Arg Glu Leu Pro Asp Pro Gly Ala Asp Arg Asp Arg Lys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Gln Gly Ala Trp Asn Ser Gly

ISG60基因TPR结构基序序列

①序列特征：

a.长度：34个氨基酸

b.类型：多肽

c.链型：单链

d.几何结构：立体

e.数量：7个

②序列描述：

3.根据权利要求1所述的与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位，其特征在于：其序列的一致性达到60％以上的TPR结构基序的序列。