[发明专利]一种农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株的方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导法获得转基因黄瓜植株的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）选取6~7 d苗龄、两片子叶张开呈竖直状态的无菌黄瓜幼苗，切取连带下胚轴2 mm子叶，去除生长点，从下胚轴处纵切为二，切除子叶末端1/3部分，并切除叶缘得到外植体子叶节；将子叶节平铺于分化培养基MS + 1.5~1.7 mg·L^-1 6-BA上置于黑暗中进行预培养2 d；

2）把经过预培养的子叶节浸没在农杆菌悬浮液中 15~20 min；侵染结束后用无菌纸吸干子叶节表面残留的菌液，将子叶节置于分化培养基MS + 1.5~1.7 mg·L^-1 6-BA上置于黑暗中进行共培养2~3 d；

3）共培养结束后，用含有250 mg·L^-1 Cb的液体 MS 培养基洗净外植体表面农杆菌，用无菌纸吸干子叶节表面的液体；

4）将上述处理好的子叶节接种到分化及选择培养基MS + 1.5~1.7 mg·L^-1 BA  +100~150 mg·L^-1 Kan + 250 mg·L^-1 Cb上进行芽诱导培养不定芽；待不定芽长至1.5~2 cm 高时，将其从子叶节基部切下，接种到生根培养基MS + 50mg·L^-1 Kan上进行生根培养；当不定芽基部产生大量须根，逐步开启封口膜，炼苗一周后移栽入土。