[发明专利]不含明胶、人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品领域,特别是用于预防甲型肝炎的不含明胶、不含人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及其制备方法。

背景技术

甲型肝炎作为我国重要的传染病之一，随着经济的发展，生活条件的改善，以及近十几年来国内自制甲肝疫苗的推广应用，该病的发病率平均每年已20%明显下降。然而一些中西部地区，甲肝发病率仍居高不下。即使在东部一些发达省份，甲肝爆发亦时有发生。

随着国家对“民生”问题的日益关注， 2007年3月，温家宝总理在第十届全国人民代表大会第五次会议上，将甲型肝炎等15种可以通过接种疫苗有效预防的传染病全部纳入国家计划免疫，对疫苗实行批签发管理制度；在国际市场，甲肝疫苗作为我国第一个具有自主知识产权、通过国际标准论证的生物制品，已出口印度、危地马拉、菲律宾等国家,在很多发展中国家甲肝仍未得到控制的大环境下，我国的甲肝疫苗出口还面临着一个巨大的、可拓展的国际市场空间，对疫苗生产的产量和质量提出了更高的要求。

近年来，随着生物技术的飞速发展，人们对冻干制品，冻干保护剂及其保护机理的研究更加深入。开发更优越的冻干保护剂、提高冻干制品的质量，仍是现今生物技术研究的方向。国家药典会病毒类制品专业委员会也在2007年7月17日至7月19日北京会议纪要中明确要求，“作为稳定剂成分的明胶注射到人体后可发生过敏反应，生产企业应进行取代明胶成分的相关研究工作，以进一步提高制品的安全性”。传统的冻干保护剂配方中往往含有明胶或人血白蛋白，但由于国产明胶内毒素含量偏高，而进口明胶有携带疯牛病病毒的潜在危险，人血白蛋白易发生过敏反应，针对这一问题，需研究一系列明胶的替代

品来改进传统的配方，目前，尚无文献报道。

发明内容

本发明的目的是研究不含明胶、不含人血白蛋白的冻干甲型肝炎减毒活疫苗的新一代保护剂，使内毒素含量下降，不易发生过敏反应，并能工业规模化生产的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗。

本发明经过多年研究，对各种配方的保护剂的研究情况，选定不含明胶、不含人血白蛋白的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂，简称（16-3）为最佳配方，用于冷冻干燥甲肝疫苗的生产。

该保护剂含有海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化镁、硫酸镁、山梨醇、甘露醇、三羟甲基氨基甲烷。将此配方的保护剂与甲肝疫苗原液混合，配制成半成品，进行分装、冻干，对冻干前后疫苗的病毒感染性滴度及冻干后的热稳定性进行检测，并与原含明胶的生产配方相比较，结果发现，该保护剂的保护作用很好，冻干过程中疫苗病毒的感染性滴度下降幅度明显减少，成品的内毒素含量则明显下降（低于0.25EU/ml），用此配方生产的冻干疫苗接种人体，结果表明疫苗的免疫效果和安全性良好。

本发明由甲肝病毒和冷冻干燥保护剂组成，保护剂（16-3）由海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化镁、硫酸镁、山梨醇、甘露醇、三羟甲基氨基甲烷组成。

不含明胶、不含人血白蛋白的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂简称（16-3）配方组份为：海藻糖4-12克%、右旋糖酐40 0.6-1.8克%、L-半胱氨酸0.1-0.5克%、精氨酸0.2-0.8克%、谷氨酸0.4-1.0克%、甘氨酸0.5-2.0克%、氯化镁0.1-0.5克%、硫酸镁0.1-0.5克、山梨醇1-4克%、甘露醇1-4克%、三羟甲基氨基甲烷适量。

不含明胶、人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗的制备方法：每1000毫升加入海藻糖40-120克、右旋糖酐40  6-18克、L-半胱氨酸1-5克、精氨酸2-8克、谷氨酸4-10克、甘氨酸5-20克、氯化镁1-5克、硫酸镁1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羟甲基氨基甲烷适量。溶解后除菌过滤，将甲肝疫苗原液按每人份接种病毒量7.00-7.38lgCCID₅₀/ml比例混合，配制成半成品，进行灌装,采用冷冻干燥，冷冻干燥箱预冷-20℃～-50℃的温度3-5小时，冻干箱搁板温度-35℃～-50℃，开真空、升华，二次冻干箱搁板温度15℃～30℃，即制成冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗。

具体步骤如下：

1.提供甲型肝炎病毒活病毒原液。