[发明专利]瘦肉精多残留联检试纸卡及其制备方法

权利要求书

1.一种瘦肉精多残留联检试纸卡，包括塑料支撑物和试纸芯，塑料支撑物包括底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、层析膜和吸水垫依次粘贴到衬板上制成，层析膜上设有检测线和对照线，其特征是：所述金标物结合垫为吸附有二～五种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗瘦肉精的单克隆抗体或多克隆抗体，检测线为二～五条相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原，对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗载体蛋白IgG抗体印制而成，检测线和对照线沿层析膜横向平行排列。

2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述金标抗体和相应的瘦肉精-载体蛋白结合抗原或人工合成的模拟结合抗原为：第一组：金标抗盐酸克伦特罗CL抗体，检测线为CL-载体蛋白结合抗原；第二组：金标抗莱克多巴胺RAC抗体，检测线为RAC -载体蛋白结合抗原；第三组：金标抗沙丁胺醇SAL抗体，检测线为SAL-载体蛋白结合抗原；第四组：金标特步特林TBL抗体，检测线为TBL-载体蛋白结合抗原；第五组：金标抗西马特罗CIM抗体，检测线为CIM-载体蛋白结合抗原；采用其中的二组、三组、四组或五组，分别组成二联检试纸卡、三联检试纸卡、四联检试纸卡或五联检试纸卡。

3.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述吸水垫采用滤纸、海绵或无纺布制作，所述衬板用不吸水的硬质塑胶条制作，所述样品垫采用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制作；层析膜采用尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜制成，对照线采用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、人血清白蛋白或钥孔血蓝蛋白。

4.权利要求1所述的瘦肉精多残留联检试纸卡的制备方法，包括瘦肉精-载体蛋白结合抗原的制备、瘦肉精金标物的制备、IgG抗体的制备、试纸芯的制备，其特征是：所述瘦肉精-载体蛋白结合抗原包括以下瘦肉精金标抗体和相应的结合抗原，第一组：金标抗盐酸克伦特罗抗体，检测线为CL-载体蛋白结合抗原；第二组：金标抗莱克多巴胺抗体，检测线为RAC -载体蛋白结合抗原；第三组：金标抗沙丁胺醇抗体，检测线为SAL-载体蛋白结合抗原；第四组：金标特步特林抗体，检测线为TBL-载体蛋白结合抗原；第五组：金标抗西马特罗抗体，检测线为CIM-载体蛋白结合抗原。

5.权利要求4所述的制备方法，其特征是：所述CL-载体蛋白结合抗原制备时包括以下步骤：在0～4℃冰浴条件下，称取5～15mg CL 溶于1～3mL、0.1mol/L的稀盐酸中，搅拌下滴加浓度为10%的NaNO₂溶液，反应2～4h，得到反应液；称取5-10mg载体蛋白溶于1-3mLPBS液中，搅拌下缓慢加入所述反应液中，调节pH至8.5～9.5，0～4℃搅拌、过夜；收集反应液于透析袋中，在4℃下用PBS透析3～5天，每天更换透析液2～3次，最后得到所述CL-载体蛋白结合抗原。

6.根据权利要求4所述的试纸卡，其特征是：所述RAC -载体蛋白结合抗原制备时包括以下步骤：称取5～20mg的载体蛋白置于螺口瓶中，用双蒸水溶解，用1 mol/L 的NaOH调节pH 至10.8，加入1,4-丁二醇二缩水甘油醚，氮气保护下室温避光搅拌24 h，得活化的载体蛋白溶液；称取15～20mg TBL溶于2-5ml、1 mol/L 的NaOH 中，搅拌下缓缓加入所述载体蛋白溶液中，氮气保护下搅拌20 h，反应产物用PBS透析3天，每天换液3～6次，透析后得到纯化的RAC -载体蛋白结合抗原。

7.根据权利要求4所述的试纸卡，其特征是：所述SAL-载体蛋白结合抗原制备时包括以下步骤：将80-100mg硫酸沙丁胺醇加入甲醇中，室温下搅拌使之溶解，加入40-60mg琥珀酸酐，搅拌下反应72h；将反应后的溶液放在通风橱中12h，使甲醇挥发完全，然后放入真空干燥箱中烘干，得到沙丁胺醇琥珀酸衍生物；称取该衍生物20-30 mg溶于pH为4.8的tris-HCL缓冲液中，加入碳二亚胺30～40mg，搅拌反应12h，得反应液；称取载体蛋白20-30mg溶于2-5mL的tris-HCL缓冲液中，得到载体蛋白溶液；将所述载体蛋白溶液逐滴加入所述反应液中，室温下搅拌反应24h；反应结束后装入透析袋中4℃PBS透析72h，换液6～9次，即得到SAL-载体蛋白结合抗原。