[发明专利]一种菌落PCR方法及试剂盒无效
| 申请号： | 201110159586.2 | 申请日： | 2011-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN102230010A | 公开（公告）日： | 2011-11-02 |
| 发明（设计）人： | 王建设;王凡;王安如 | 申请（专利权）人： | 北京大北农科技集团股份有限公司;北京科高大北农饲料有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 冯琼;李玉秋 |
| 地址： | 100080 北京市海淀区中*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 菌落 pcr 方法 试剂盒 | ||
【权利要求书】：
1.一种菌落PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取菌落在含溶菌酶或蜗牛酶的缓冲液中37℃水浴处理30～60min；
2)在沸水中煮10min，离心后取上清进行PCR反应。
2.根据权利要求1所述的菌落PCR方法，其特征在于，所述菌落为乳酸菌、芽孢杆菌或酵母菌的菌落。
3.根据权利要求1所述的菌落PCR方法，其特征在于，所述溶菌酶浓度为0.4～0.5mg/mL。
4.根据权利要求1所述的菌落PCR方法，其特征在于，所述蜗牛酶浓度为3～4mg/mL。
5.根据权利要求1所述的菌落PCR方法，其特征在于，所述PCR反应如为阴性结果，取菌落在含蜗牛酶或溶菌酶的缓冲液中37℃水浴处理30～60min；在沸水中煮10min，离心后取上清再进行PCR反应。
6.根据权利要求1所述的菌落PCR方法，其特征在于，步骤2)所述PCR反应条件为95℃ 10min；94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min30s，共30个循环；72℃延伸10min。
7.一种菌落PCR试剂盒，其特征在于，包括溶菌酶或蜗牛酶。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括细菌的通用引物27F和1492R、Taq酶、PCR缓冲液和dNTP混合物。
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