[发明专利]一种检测氯霉素的免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种检测氯霉素的免疫层析试纸，包括含有超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体的样品垫、连接于所述样品垫一端的反应垫、连接于所述反应垫另一端的吸水垫；所述反应垫包被有相互分离的检测线和质控线，所述检测线含有氯霉素抗原，所述质控线含有能与所述氯霉素抗体特异结合的抗抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于：

所述反应垫为硝酸纤维素膜；

所述超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体为氯霉素抗体和超顺磁性复合粒子的肽键共价结合形成的聚合体；

所述氯霉素抗体为氯霉素单克隆抗体或氯霉素多克隆抗体，所述氯霉素抗体具体为氯霉素单克隆抗体；

所述氯霉素抗原为氯霉素半抗原与载体蛋白的偶联物；

所述载体蛋白与氯霉素半抗原的偶联比为1∶8～1∶10，所述载体蛋白与氯霉素半抗原的偶联比具体为1∶10；

所述与所述氯霉素抗体特异结合的抗抗体为羊抗鼠IgG抗体；

所述氯霉素抗原和所述羊抗鼠IgG抗体的浓度均为1mg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的试纸，其特征在于：

所述超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体按照如下方法制备：

1)将每2.5mg超顺磁性复合粒子、0.96mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.15mg N-羟基丁二酰亚胺和1ml浓度为0.1M、PH值为4.7的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液混匀，反应，得到活化后磁性粒子；

2)将每2.5mg步骤1)得到活化后磁性粒子、0.15mg氯霉素抗体和0.8ml浓度为50mM pH为8.5的硼砂缓冲液混匀、反应，得到含有偶联后磁性粒子的反应液；

3)向步骤2)得到的反应液中加入BSA混匀得到混合液、反应，得到含有封闭后磁性粒子的反应液；

所述BSA在所述混合液中的浓度为5％(质量百分含量)，

所述氯霉素抗原按照如下方法制备：

A)将每50mg氯霉素半抗原、1ml无水乙醇、24mg锌粉混匀，反应，得到反应液a；

B)将步骤A)得到的反应液a离心取上清液，每1ml上清液加入180ul浓度为1.45mol/L的NaNO₂水溶液反应，得到溶液b；

C)将每400mg载体蛋白和10ml浓度为0.02mol/L、pH为7.4的PBS缓冲液混合，得到溶液c；

D)将每1ml步骤B)得到的溶液b和10ml步骤C)得到的溶液c混匀，反应，得到反应液d。

4.根据权利要求1-3中任一所述的试纸，其特征在于：

所述超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体的制备方法中：

步骤1)中，所述反应温度为37℃，所述反应时间为0.5h，

步骤2)中，所述反应温度为25℃，所述反应时间为3.5h，

步骤3)中，所述反应温度为37℃，所述反应时间为0.5h，

所述氯霉素抗原的制备方法中，

步骤A)中，所述反应温度为65℃，所述反应时间为40分钟；所述反应的pH值为1；

步骤B)中，所述反应时间为3h；所述反应温度为4℃，所述反应pH值为1；所述离心的时间为10min、所述离心的离心力为4000g，所述离心的温度为4℃；

步骤C)中，所述反应的温度为4℃，所述反应的时间为6h，所述反应的PH值为8.5。

5.根据权利要求1-4中任一所述的试纸，其特征在于：

所述超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体的制备方法中：

在所述步骤3)后，还包括将所述含有封闭后磁性粒子的反应液中的封闭后磁性粒子进行洗涤、悬浮，得到超顺磁性复合粒子标记氯霉素抗体的步骤，所述洗涤液和悬浮液均为浓度为0.02M pH为7.4的PBS缓冲液；

所述氯霉素抗原的制备方法中，

在所述步骤D)后还包括如下步骤E)：

将步骤D)得到的反应液d透析、冻干，得到氯霉素抗原。