[发明专利]VKORC1基因的第-1639位碱基的多态性检测方法、以及用于该方法的核酸探针和试剂盒

权利要求书

1.一种多态性检测用探针，其特征在于，其为用于检测VKORC1基因的第-1639位碱基的多态性的探针，所述探针由寡核苷酸构成，该寡核苷酸为序列号1或序列号2所示的碱基序列中包含碱基序号80～89的10～50个碱基长度的碱基序列，该寡核苷酸除了对应于序列号1或序列号2中第80号碱基的碱基为胞嘧啶以外与序列号1或序列号2具有同源性，且对应于碱基序号80的碱基被荧光染料标记。

2.根据权利要求1所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸中，在从5’末端数起第1～3号位置具有被荧光染料标记的对应于碱基序号80的碱基。

3.根据权利要求1所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸在5’末端具有被荧光染料标记的对应于碱基序号80的碱基。

4.根据权利要求1～3任一项所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸当未与目标序列杂交时发出荧光，且当与目标序列杂交时荧光强度减少或增加。

5.根据权利要求4所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸当未与目标序列杂交时发出荧光，且当与目标序列杂交时荧光强度减少。

6.根据权利要求1～5任一项所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸的碱基长度为10～40。

7.根据权利要求1～6任一项所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸的碱基长度为15～30。

8.根据权利要求1～7任一项所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸的碱基长度为15～25。

9.根据权利要求1～8任一项所述的多态性检测用探针，所述探针是融解曲线分析用的探针。

10.根据权利要求1～9任一项所述的多态性检测用探针，所述寡核苷酸以序列号6表示。

11.一种多态性检测方法，其为使用权利要求1～10任一项所述的多态性检测用探针来检测VKORC1基因附近区域的多态性的方法。

12.根据权利要求11所述的多态性检测方法，该方法包括：

(I)使权利要求1～10任一项所述的多态性检测用探针和试样中的单链核酸接触，从而使所述荧光标记寡核苷酸和所述单链核酸进行杂交来获得杂交产物的步骤；

(II)通过改变包含所述杂交产物的试样的温度，从而使所述杂交产物解离，并测定基于所述杂交产物的解离的、荧光信号的变动的步骤；

(III)基于所述信号的变动来确定杂交产物的解离温度、即Tm值的步骤；以及

(IV)基于所述Tm值，确定VKORC1基因中的多态性的存在或者具有多态性的核酸的存在比的步骤。

13.根据权利要求12所述的多态性检测方法，该方法还包括：在所述步骤(I)之前或与所述步骤(I)同时进行核酸的扩增的步骤。

14.一种判断华法林的适用量的方法，该方法包括：

通过权利要求11～13任一项所述的多态性检测方法来检测VKORC1基因附近区域的多态性的步骤；以及，基于所检测出的多态性的有无来判断华法林的适用量的步骤。

15.一种多态性检测用试剂盒，其包含权利要求1～10任一项所述的多态性检测用探针。

16.根据权利要求15所述的多态性检测用试剂盒，还包含：能够以序列号1所示碱基序列中包含所述寡核苷酸所杂交的序列的区域为模板进行扩增的引物。

17.根据权利要求16所述的多态性检测用试剂盒，所述引物是序列号3和4所记载的引物。

18.根据权利要求16或17所述的多态性检测用试剂盒，还包含：序列号8、9所记载的引物和序列号10所记载的探针。