[发明专利]一种改造大肠杆菌产维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的方法有效
申请号: | 201110146020.6 | 申请日: | 2011-06-01 |
公开(公告)号: | CN102250821A | 公开(公告)日: | 2011-11-23 |
发明(设计)人: | 陈坚;高丽丽;周景文;堵国成 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/31;C12N15/63;C12P7/60;C12R1/19 |
代理公司: | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人: | 王秀丽 |
地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 改造 大肠杆菌 维生素 酮基 古龙酸 方法 | ||
1.一种高产2-KLG的大肠杆菌(Escherichia coli)基因工程菌,其特征在于表达外源sldh、sdh/sndh、pqq基因。
2.权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述sldh基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述sdh/sndh基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述pqq基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述sldh、sdh/sndh、pqq基因克隆于pET28a(+)质粒中。
6.构建权利要求1所述基因工程菌的方法,其特征在于包括如下步骤:
1)分别设计引物克隆Gluconobacter oxydans 621H中sldh基因和pqq基因;根据本实验室对K.vulgare DSM4205的全基因组测序结果中注释的sdh/sndh基因序列设计引物克隆sdh/sndh基因;
2)将sldh、sdh/sndh、pqq基因与载体连接得到重组表达载体;
3)将得到的重组表达载体转化大肠杆菌(Escherichia coli)后得到重组菌株。
7.应用权利要求1所述基因工程菌生产2-KLG的方法,其特征在于工程菌种子培养后,按10%比例接种5L发酵罐,发酵16h后流加量碳源2.5g/L.h,发酵参数:转速500rpm,pH 5.1~5.4,通气量1.5vvm,控制罐温30℃,罐压0.05MPa,发酵罐溶氧反弹到20%-30%时添加IPTG至终浓度0.5mM。
8.权利要求7所述的方法,其特征在于所述碳源为山梨醇。
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