[发明专利]检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法，属于医药技术领域，具体地，涉及检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法，包括用四噻唑蓝(MTT)法测定MCF-7细胞的存活率和曲妥珠降低MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达水平检测步骤，确切地说硫氧还蛋白Trx-1是曲妥珠的抗乳腺癌的新靶点。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶肿瘤的7％-10％。乳腺癌是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一，20世纪以来乳腺癌的发病率在世界各地均有上升趋势。

硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)是一种普遍存在于原核生物和真核生物中的小分子蛋白质，它与NAPDH和硫氧还蛋白还原酶组成细胞内主要的氧化还原系统。根据表达部位的不同，硫氧还蛋白分为3类：Trx-1、Trx-2和spTrx。Trx-1与人类疾病发生密切相关。TRX-1是生物体所必须的基因，如果选择性地敲除小鼠的Trx-1基因，小鼠则早期胚胎致死，不能存活(Matsui M.，OshimaM.，Oshima H.，Takaku K.，Maruyama T.，Yodoi J.，and Taketo M.M.Early embryonic lethalitycaused by targeted disruption of the mouse thioredoxin gene.Dev.Biol.1996，178：179-185)。Trx-1是细胞内一种有效的抗氧化剂，能保护细胞、减轻氧化应激所致的损伤。Trx-1抑制p38 MAPK和凋亡信号调节激酶1相关的凋亡信号传导途径，增强细胞的抗凋亡能力(Saito M.，Nishitoh，H.，Fujii，M.，Takeda，K.，Tobiume，K.，Sawada，Y.，Kawabata，M.，Miyazono，K.，and Ichijyo，H.Mammalian thioredoxin is a direct inhibitor of apoptosissignal-regulating kinase(ASK)1.EMBO，1998，17：2596-2606)。在多种癌症组织中，包括乳腺癌组织Trx-1的表达增高，并且Trx-1的表达的高低与癌症预后呈正相关关系，Trx-1的表达越高癌症预后越差。

有关乳腺癌的治疗包括了手术治疗、化疗等，目前，生物治疗如抗体治疗已在临床上开展。临床上，曲妥珠作为HER2的抗体用于治疗HER2过量表达乳腺癌患者的主要的治疗药物。然而，曲妥珠的作用靶点还不十分清楚。也没有涉及检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法的报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法，过检测曲妥珠对乳腺癌细胞株MCF-7生长抑制和MCF-7中Trx-1的观察，提出曲妥珠抑制MCF-7生长与降低Trx-1的表达有关，证实曲妥珠的抗乳腺癌的新作用靶点。

本发明旨在证实曲妥珠能抑制硫氧还蛋白的表达。

本发明用下述的技术方案来实现发明目的：检测曲妥珠影响MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达的方法，包括用四噻唑蓝(MTT)法测定MCF-7细胞的存活率和曲妥珠降低MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达水平检测步骤，所述四噻唑蓝MTT法测定MCF-7细胞的存活率是用MCF-7细胞株的培养，MCF-7细胞的排板，梯度浓度曲妥株刺激，四噻唑蓝MTT试验来进行；所述曲妥珠降低MCF-7细胞中Trx-1蛋白表达水平检测步骤是用细胞株培养和曲妥珠刺激处理，免疫印迹步骤来进行。