[发明专利]控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，更具体地说，涉及一种控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法。属于药物化学分析技术领域。

背景技术

恩替卡韦是一种抗乙肝病毒药，能有效地抑制乙肝病毒的复制，具有较强的抗HBV作用，恩替卡韦的结构为：

恩替卡韦分子结构中含有3个手性碳原子，其是一种手性药物，所以在实际合成过程中，除合成恩替卡韦的有效成份(1S，3R，4S)-恩替卡韦药物外，其它的手性结构的恩替卡韦则相应的生成光学异构体杂质。相应的从原料开始合成目标产物的过程中，则也只有一种结构的中间体最终才能合成(1S，3R，4S)-恩替卡韦，其它结构的中间体异构体则也相应的生成光学异构体杂质。

然而，现有技术中对恩替卡韦的检测方法的报道，尤其是对恩替卡韦合成过程中恩替卡韦中间体的检测方法的报道较少见。如中国专利申请(公开号：101701942A)公开了一种用高效液相色谱法分离测定恩替卡韦及其对映体的检测方法，其中采用三(3，5-二甲基苯基)-氨基甲酸酯链淀粉为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，正己烷-低级醇溶液体积比为25∶75～75∶25，设定柱温为40℃，流速为1.3ml/min，检测波长为254nm。该方法虽然能够检测出恩替卡韦药物中其它异构体的含量，且从谱图中也可以看出，其恩替卡韦主峰也能够很好的与其它异构体分离开，但是该方法只针对最终的恩替卡韦药物的检测分析，更具体的说，该方法只是对恩替卡韦成品的一种检测分析方法，并没有披露恩替卡韦在合成过程中涉及的中间体的检测分析方法。

发明内容

本发明针对以上现有技术中所存在的缺陷，提出一种控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法，该方法分离度大、能够从源头控制恩替卡韦产品的质量，使得到的恩替卡韦产品的手性纯度高，产品稳定。

本发明的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：一种控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法，该方法是采用反相色谱法结合手性色谱法一起检测分析；所述的反相色谱法是采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水相为流动相A，以乙腈为流动相B；所述的手性色谱法是采用以三(3，5-二甲基苯基)-氨基甲酸酯直链为填充剂的手性色谱柱，以低级烷烃-低级醇为流动相。

上述控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法中，其中，恩替卡韦是采用以下方法合成的，该方法的反应方程式：

从上述原料N5合成目标产物恩替卡韦N9，需要经过合成中间体N6、中间体N7、中间体N8，最终才合成目标产物恩替卡韦N9。恩替卡韦是含有3个手型原子结构的物质，其有8异构体，除目标产物(1S，3R，4S)-恩替卡韦，其它异构体则以异构体杂质的形式存在。相应的在合成过程中，其中间体也同样存在着异构体杂质，从而影响到最终产品的纯度。而利用本发明的方法，能够有效的分离出主峰与其它异构体的出峰时间，也能有效的分离出其在合成过程中各个中间体的异构体之间的分离，从而实现了从源头控制和生产过程控制来全面的控制恩替卡韦的手性纯度。

本发明的控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法，其中所述的水相为乙腈-水缓冲液、磷酸盐缓冲液、TFA缓冲液或水中的一种或几种。其中的乙腈-水缓冲液的乙腈与水的体积比为1～5∶99∶95，作为优选，乙腈与水的体积比为3∶97；其中所述的磷酸缓冲液的质量分数为0.01％～0.5％，所述的磷酸为磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾或磷酸中的或几种，作为优选，质量分数为0.1％；其中所述的TFA的质量分数为0.01％～0.5％，作为优选，质量分数为0.1％。

上述所述的控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法，其中所述的手性色谱柱为Daicel CHIRALPAKAD、Daicel CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK IC、AD-H中的一种，作为优选，所述的手性色谱柱为CHIRALPAK AD-H、AD-H中的一种。采用AD-H等手性色谱柱，能够有效的分离出恩替卡韦的光学异构体，达到控制产品手性纯度的要求，更重要是的能够实现从原料N5及其各中间体的光学异构体的手性纯度，达到了从源头控制产品的纯度。

所述的控制恩替卡韦及其中间体有关物质和异构体含量的检测方法，其中所述的低级烷烃为正庚烷、正己烷、正丁烷或正戊烷中的一种或几种，作为优选，所述的低级烷烃为正庚烷、正己烷中的一种或两种。